1 范围

本标准规定了食品中丙烯酰胺的测定方法。

本标准适用于热加工(如煎、炙烤、焙烤等)食品中丙烯酰胺的测定。

2 原理

本标准应用稳定性同位素稀释技术，在试样中加入¹³C₃标记的丙烯酰胺内标溶液，以水为提取溶剂,经过固相萃取柱或基质固相分散萃取净化后，以液相色谱-质谱/质谱的多反应离子监测(MRM)或选择反应监测(SRM)进行检测，内标法定量。

3 试剂和材料

注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

3.1 试剂

3.1.1 甲酸(HCOOH)：色谱纯。

3.1.2 甲醇(CH₃OH)：色谱纯。

3.1.3 正己烷(n-C₆H₁₄)：分析纯，重蒸后使用。

3.1.4 乙酸乙酯(CH₃COOC₂H₅)：分析纯，重蒸后使用。

3.1.5 无水硫酸钠(Na₂SO₄):400℃,烘烤4h。

3.1.6 硫酸［(NH₄)₂SO₄］。

3.1.7 硅藻土：Extrelut™20或相当产品。

3.2 标准品

3.2.1 丙烯酰胺(CH₂=CHCONH₂)标准品(纯度＞99%)。

3.2.2 ¹³C₃-丙烯酰胺(¹³CH₂=¹³CH¹³CONH₂)标准品(纯度＞98%)。

3.3 标准溶液的配制

3.3.1 丙烯酰胺标准溶液的配制

3.3.1.1 丙烯酰胺标准储备溶液(1000mg/L):准确称取丙烯酰胺标准品，用甲醇溶解并定容，使丙烯酰胺浓度为1000mg/L,置-20℃冰箱中保存。

3.3.1.2 丙烯酰胺中间溶液(100mg/L)：移取丙烯酰胺标准储备溶液1mL,加甲醇稀释至10mL,使丙烯酰胺浓度为100mg/L,置-20℃冰箱中保存。

3.3.1.3 丙烯酰胺工作溶液I(10mg/L)：移取丙烯酰胺中间溶液1mL,用0.1%甲酸溶液稀释至10mL,使丙烯酰胺浓度为10mg/L。临用时配制。

3.3.1.4 丙烯酰胺工作溶液II (1mg/L)：移取丙烯酰胺工作溶液 1mL,用0.1%甲酸溶液稀释至10mL，使丙烯酰胺浓度为1mg/L。临用时配制。

3.3.2 丙烯酰胺内标溶液

3.3.2.1 ¹³C₃-丙烯酰胺内标储备溶液(1000mg/L):准确称取¹³C₃-丙烯酰胺标准品，用甲醇溶解并定容，使¹³C₃-丙烯酰胺浓度为1000mg/L,置-20℃冰箱保存。

3.3.2.2 内标工作溶液(10mg/L)：移取内标储备溶液1mL,用甲醇稀释至100mL,使¹³C₃-丙烯酰胺浓度为10mg/L,置-20℃冰箱保存。

3.3.3 标准曲线工作溶液

取6个10mL容量瓶，分别移取0.1mL、0.5mL、ImL丙烯酰胺工作溶液Ⅱ(1mg/L)和0.5mL、1mL和3mL丙烯酰胺工作溶液I(10mg/L)与内标工作溶液(10mg/L)0.1mL,用0.1%甲酸溶液稀释至刻度。标准系列溶液中丙烯酰胺的浓度分别为10ug/L、50ug/L、100ug/L、500ug/L、1000ug/L、3000ug/L,内标浓度为100ug/L。临用时配制。

4 仪器和设备

4.1 液相色谱—质谱/质谱联用仪(LC-MS/MS)。

4.2 HLB固相萃取柱：6mL、200mg,或相当产品。

4.3 BondElut-Accucat固相萃取柱：3mL、200mg,或相当产品。

4.4 组织粉碎机。

4.5 旋转蒸发仪。

4.6 氮气浓缩器。

4.7 振荡器。

4.8 玻璃层析柱：柱长30cm,柱内径1.8cm。

4.9 涡旋混合器。

4.10 超纯水装置。

4.11 分析天平：感量为0.1mg。

4.12 离心机：转速≤10000r/m。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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