5 分析步骤

5.1 试样制备

5.1.1 可乐型饮料；

a)脱气:样品用超声清洗器在40℃下超声5min；

b)净化：称取5g(精确至0.001g)样品，加水定容至5mL(使样品溶液中咖啡因含量在标准曲 线范围内)，摇匀，加入0.5g氧化镁，振摇，静置，取上清液经微孔滤膜过滤，备用。

5.1.2 不含乳的咖啡及茶叶液体制品：称取5g(精确至0.001g)样品，加水定容至5mL(使样品溶液中咖啡因含量在标准曲线范围内),摇匀，加入0.5g氧化镁，振摇，静置，取上清液经微孔滤膜过滤, 备用。

5.1.3 含乳的咖啡及茶叶液体制品：称取1g(精确至0.001g)样品，加入三氯乙酸溶液定容至10mL(使样品溶液中咖啡因含量在标准曲线范围内)，摇匀，静置，沉降蛋白，取上清液经微孔滤膜过滤, 备用。

5.1.4 咖啡、茶叶及其固体制品：称取lg(精确至0.001g)经粉碎低于30目的均匀样品于250mL锥形 瓶中，加入约200mL水，沸水浴30min,不时振摇，取出流水冷却1min,加入5g氧化镁，振摇，再 放入沸水浴20min,取出锥形瓶，冷却至室温，转移至250mL容量瓶中，加水定容至刻度(使样品溶 液中咖啡因含量在标准曲线范围内)，摇匀，静置，取上清液经微孔滤膜过滤，备用。

5.2 仪器参考条件

色谱柱：C₁₈柱(粒径5um,柱长150mm×直径3.9mm)或同等性能的色谱柱。

流动相：甲醇+水=24+76。

流速：1.0mL/min。

检测波长：272nm。

柱温：25℃。

进样量：10uL。

5.3 标准曲线的制作

将标准系列工作液分别注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标， 以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

5.4 试样溶液的测定

将试样溶液注入液相色谱仪中，以保留时间定性，同时记录峰面积，根据标准曲线得到待测液中咖啡因的浓度，平行测定次数不少于两次。

6 分析结果的表述

试样中咖啡因含量按公式(1)计算：

式中:

X—试样中咖啡因的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；

c—试样溶液中咖啡因的质量浓度，单位为微克每毫升(ug/mL)；

V—被测试样总体积，单位为毫升(mL)；

m—称取试样的质量，单位为克(g);

1000——换算系数。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

7 精密度

可乐型饮料：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%;咖啡、茶叶及其固体液体饮料制品：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

8 其他

本方法线性范围为220ng/mL～439ug/mL。检出限：以3倍基线噪音信号确定检出限0.7ng；可乐、不含乳的咖啡及茶叶液体饮料制品检出限为0.07mg/kg,定量限为0.2mg/kg：以含乳咖啡及茶叶液体饮料制品取样量1g,确定检出限为0.7mg/kg,定量限为2.0mg/L；以咖啡、茶叶及其固体饮料制品取样量lg,确定检出限为18mg/kg,定量限为54mg/kg。

相关链接：饮料中咖啡因的测定（一）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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