适用于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的含量测定。

标准的检出限：对于固态食品，糖精钠的检出限为3.0mg／kg。

项目操作

任务一：所需仪器设备和试剂的准备

任务二：样品预处理

用一洁净小烧杯精确称取配制酒样品(mn)10.0g(精确至0.001g)一微热搅拌除去二氧化碳和乙醇一用水定容至原体积一于25mL容量瓶一氨水(1+1)调pH≈7一加水定容至刻度一混匀—灯0.45μm滤膜过滤一滤液待上机分析

任务三：成分分析

色谱条件：①色谱柱：C18柱，25mm×4.6mm，5μm，或性能相当者：②检测器：紫外检测器，230nm波长；③流动相：甲醇+0．02moI／L乙酸铵溶液(5+95)；④流速：1mL／min；⑤检测波长：230nm；⑥进样量：10μm

测定：取处理液和混合标准使用液各10斗L注入高效液相色谱仪进行分离，以其标准溶液峰的保留时间为依据定性，以其峰面积求出样液中被测物质含量，供计算

任务四：结果记录并分析处理

苯甲酸、山梨酸和糖精钠的高效液相色谱图。

任务五：结果判断

1．安全限量值

根据配制酒卫生标准：GB2757—1981，其食品添加剂的品种和使用量应符合GB2760的规定。《食品添加剂使用标准》(GB2760—2011)规定糖精钠在各种食品中最大使用量及残留量。

【注意事项】

(1)除另有规定外，方法中所用试剂为分析纯试剂，溶液为水溶液。

(2)被测溶液的pH对测定和色谱柱使用寿命均有影响，pH>8或pH<2时会影响被测组分的保留时间，对仪器有腐蚀作用，以中性为宜。

(3)试样处理要去油脂、蛋白质、糖、淀粉、乙酸、醇类等杂质彻底，以免影响吸附及色谱分离效果。

【问题探究】

1．高效液相色谱测定原理

高效液相色谱是采用液体为流动相的一种色谱法。高效液相色谱仪由高压泵、进样装置、色谱柱、检测器、记录和数据处理装置等部分组成，。高压泵以恒定的流量，从贮液容器吸取作为流动相的溶剂输送到色谱柱，试样由进样装置导入，随流动相在色谱柱内进行分离。分离后的组分进入检测器检测，并用记录仪绘出色谱图，或与其他数据处理装置相连，由数据处理系统进行数据处理。

色谱图：某一波长下各个不同时刻的吸光度值描点作图。

2．其他样品的预处理方法

(1)液体样品

①A、碳酸饮料、果酒、葡萄酒等液体样品：称取10g样品(精确至0.001g)(如含有乙醇需水浴加热除去乙醇后再用水定容至原体积)于25mL容量瓶中，用氨水(1+1)调节pH至近中性，用水定容至刻度，混匀，经微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。

②乳饮料、植物蛋白饮料等含蛋白质较多的样品：称取10g样品(精确至0.001g)于25mL容量瓶中，加入2mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入2mL乙酸锌溶液摇匀，以沉淀蛋白质，加水定容至刻度，4000r／min离心10min，取上清液，经微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。

(2)半固体样品

①含有胶基的果冻样品：称取0.5～lg样品(精确至0.001g)，加水适量，转移至25mL容量瓶中，再加水至约20mL，置60℃～70℃水浴中加热片刻，加塞，剧烈振摇使其分散均匀后，加氨水(1+1)调节pH至近中性，加塞，剧烈振摇，使样品在水中分散均匀，置60～70℃水浴锅中加热30min，取出后趁热超声5min，冷却后用水定容至刻度，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。

②油脂、奶油类样品：称取2～3g样品(精确至0.001g)于50mL具塞离心管中，加入10mL正己烷，用旋涡混合器使其充分溶解，4000r／min离心3min，吸出正己烷提取液转移至250mL分液漏斗中，再向50mL具塞离心管中加入10mL正己烷重复上述步骤，合并正己烷提取液于250mL分液漏斗中。于分液漏斗中加入20mLpH4.4乙酸盐缓冲溶液加塞后剧烈振摇分液漏斗约30s，静置分层后，将水层转移至50mL容量瓶中，再加人20mLpH4.4乙酸盐缓冲溶液，重复上述步骤，合并水层并用乙酸盐缓冲溶液定容至刻度，经微孔滤膜的过滤，滤液待上机分析。

(3)固体样品

①肉制品、饼干、糕点：称取粉碎均匀样品2～3g(精确至0.001g)于小烧杯中，用20mL水分数次清洗小烧杯将样品移入25mL容量瓶中，超声振荡提取5min，取出后加2mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入2mL乙酸锌溶液，摇匀，用水定容至刻度。移人离心管中，4000r／min离心5min，吸出上清液，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。

②油脂含量高的火锅底料、调料等样品：称取样品2～3g(精确至0.001g)于50mL具塞离心管中，加入10mL磷酸盐缓冲液，用旋涡混合器充分混合，然后于4000r／min离心5min，小心吸出水层转移到25mL容量瓶中，再加入10mL磷酸盐缓冲液于具塞离心管中，重复上述步骤，合并两次水层液，用磷酸盐缓冲液定容至刻度，混匀，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。

③凝胶糖果、胶基糖果：按半固体样品含有胶基的果冻样品处理。