1 范围

本标准规定了进出口动物源食品中哌嗪残留量的液相色谱-质谱/质谱检测和确证方法。

本标准适用于牛肉、牛肝、牛肾、蛋、鳗鱼、蜂蜜等动物源食品中哌嗪残留量的检测和确证。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

3 方法提要

试样中残留的哌嗪用1％氨水乙腈提取，过硅藻土柱净化，或用乙腈饱和正己烷液液分配净化，用液相色谱-质谱质谱测定和确证，外标法定量。

4 试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 乙腈：色谱纯。

4.2 正己烷：色谱纯。

4.3 氨水。

4.4 异丙醇。

4.5 甲酸：色谱纯。

4.6 1％氨水乙腈：取1 mL氨水用乙腈定容至100 mL。

4.7 0.3％甲酸乙腈：取0.3 mL,甲酸用乙腈定容至100 mL。

4.8 氨水-乙腈溶液(2+3，体积比)：准确移取20 mL氨水和30 mL乙腈混合均匀。

4.9 乙腈-水溶液(1+4，体积比)：准确移取10 mL乙腈和40 mL水混合均匀。

4.10 乙腈饱和正己烷：100 mL乙腈中加入100 mL，正己烷，充分振荡后，静置分层，取上层正己烷。

4.11 微孔滤膜：0.22um，有机相。

4.12 哌嗪标准作品：(piperazine，分子式：C₄H₁₀N₂, CAS编号：110-85-0)纯度大于或等于99.0％。

4.13 哌嗪标准储备溶液(100 mg/L)：准确称取适量哌嗪标准品(4.12)置于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，混匀，-18℃保存。

4.14 哌嗪标准中间溶液(1.0mg/L)：分别吸取1.0 mL标准储备溶液(4.13)于100 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，4℃保存。

4.15 哌嗪标准工作溶液：根据需要移取一定量的标准中间溶液(4.14)，用空白基质溶液逐级稀释成适当浓度的标准工作溶液，现配现用。

4.16 硅藻土柱：称取1.8g 650℃下烘培活化的硅藻土，装入底部放有一层棉花的玻璃层析柱，轻轻摇振均匀并敲实。

5 仪器和设备

5.1 液相色谱串联四极杆质谱仪或相当者，配电喷雾离子源(ESI)。

5.2 分析天平：感量为0.001g。

5.3 具塞聚四氟乙烯离心管：50 mL。

5.4 旋涡混合器。

5.5 离心机：4000r/min。

5.6 旋转浓缩仪。

5.7 氮吹浓缩仪。

6 试样制备与保存

对无结晶的蜂蜜样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在封闭情况下，置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅拌均匀，迅速冷却至室温。分出0.5 kg作为试样，置于样品瓶中，密封，并标记，常温下避光保存。

对于蛋、鳗鱼、牛肉、牛肾、牛肝等样品，从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500g，充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标记，于-18℃以下冷冻存放。
在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。

7 测定步骤

7.1 提取

7.1.1 蜂蜜

称取0.5g试样(精确至0.001g)于50 mL、离心管中，加入10 mL 1％氨水的乙腈(4.6),涡旋混合2 min，然后以4 000 r/min离心5 min。取上层清液备用。

7.1.2 蛋、鳗鱼、牛肉、牛肾、牛肝

称取试样5.0g(精确至0.01g)，置于50mL离心管中，加入15 mL 1氨水乙腈(4.6)旋涡混合2 min, 4000r/min离心5 min，提取液转移至旋转浓缩瓶中，重复上述提取操作一次，合并提取液。加入2.0 mL异丙醇,40℃旋蒸至干。准确移取5.0 mL 0.3％甲酸乙腈(4.7)涡旋1 min溶解残渣，待净化。

7.2 净化

7.2.1 蜂蜜

取上层清液过硅藻土柱(4.16)，收集流出液，然后再用25 mL氨水-乙腈溶液(4.8)洗脱硅藻土柱，合并流出液。在40℃下氮气吹干。用2mL，乙腈-水(4.9)溶解残渣，超声混匀，并加入5 mL乙腈饱和正己烷(4.10)稍加旋涡后，3000r/min离心3 min，弃去正己烷层，取1 mL下层液体过0.22um微孔滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

7.2.2 蛋、鳗鱼、牛肉、牛肾、牛肝

向样液中加入5 mL乙腈饱和正己烷(4.10)稍加旋涡后，3000r/min离心3 min，弃去正己烷层。重复该操作一次后，将乙腈层在40℃下氮气吹干。用2 mL乙腈-水(4.9)溶解残渣，超声混匀，并加入5 mL乙腈饱和正己烷(4.10)稍加旋涡后，3000r/min离心3 min，弃去正己烷层，取1 mL下层液体过0.22um微孔滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

相关链接：动物源性食品中阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷残留量检测方法（二）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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