1 范围

本标准规定了进出口动物源性食品中曲安西龙、泼尼松龙、氢化可的松、泼尼松、地塞米松、氟米松、曲安奈德残留量测定液相色谱-质谱/质谱检测方法。

本标准适用于猪肉、猪肾中糖皮质激素类兽药残留量的检测和确证。

2 方法提要

样品先加入醋酸铵缓冲溶液和β-盐酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酸酯酶水解，再用乙酸乙酯提取，提取液经HLB固相萃取小柱净化，液相色谱-质谱/质谱测定和确证，外标法定量。

3 试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。

3.1 乙腈：高效液相色谱级。

3.2 正己烷：高效液相色谱级。

3.3 乙酸乙酯：高效液相色谱级。

3.4 甲醇：高效液相色谱级。

3.5 乙酸铵。

3.6 冰乙酸。

3.7 无水硫酸钠：650℃灼烧4h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。

3.8 β-盐酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酸酯酶：含β-盐酸葡萄糖醛甙酶134600U/mL，芳基硫酸酯酶5200U/mL。

3.9 甲醇-水(3+7，体积比)，30 mL甲醇与70 mL水混合。甲醇-水(1+1，体积比)。

3.10 甲醇-水(5+5，体积比)，50 mL甲醇与50 mL水混合。

3.11 0.02 mol/L醋酸铵缓冲溶液：溶解1.54g醋酸铵于950 mL水中，用冰乙酸调节溶液pH值到5.2，最后用水稀释至1L。

3.12 标准品纯度大于等于97％。

3.13 糖皮质激素标准储备溶液：称取适量标准品(3.12)，用甲醇溶解配制成浓度为100 ug/mL的标准储备溶液，-18℃冷冻保存，有效期3个月。

3.14 标准工作溶液：根据需要用空白样品溶液将标准储备液稀释成地塞米松溶液浓度分别为1,2,4,6和8 ng/mL，泼尼松龙的溶液浓度(猪肉)分别为6,8,16,24和40 ng/mL，曲安西龙、氢化可的松、泼尼松、氟米松、曲安奈德混合溶液浓度分别为10,20,40,80和100 ng/mL。临用前现配。

3.15 无水硫酸钠柱：80 mm×40 mm(内径)筒形漏斗，底部垫5 mm脱脂棉，再装40 mm无水硫酸钠。

3.16 固相萃取柱：Oasis(HLB)500 mg，或相当者。

3.17 有机相微孔滤膜：0.45 um。

4 仪器和设备

4.1 高效液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源。

4.2 旋转蒸发器。

4.3 粉碎机。

4.4 均质器。

4.5 旋涡混合器。

4.6 离心机：7000 r/min。

4.7 氮吹仪。

4.8 天平：感量为0.01 g和0.0001g。

4.9 固相萃取装置。

4.10 恒温箱。

5 试样制备与保存

从所取全部样品中取出有代表性样品约500 g，用粉碎机粉碎，混合均匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样于-18℃冷冻保存。

在抽样和制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。

6 测定步骤

6.1 提取

称取5g试样(精确到0.01g)置于50 mL具塞塑料离心管中，加1.5 mL甲醇，再加入23.5 mL醋酸铵缓冲溶液(3.11)和40uL β-盐酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酸酯酶(3.8)，以2000r/min混匀1 min，于恒温箱中37℃培养16h，以6000r/min离心5 min，量取10.0 mL上清液，加入20 mL乙酸乙酯，以2000r/min混匀1 min，以4000r/min离心5 min，将上层乙酸乙酯提取液过无水硫酸钠柱，滤液收集于浓缩瓶中，样品残渣再加入20 mL乙酸乙酯，重复上述操作，合并乙酸乙酯提取液，在45℃以下水浴减压浓缩至近干。

6.2 净化

OasisHLB柱(3.16)使用前依次用5 mL甲醇和5 mL水预洗。用5 mL 醋酸铵缓冲溶液(3.11)溶解残渣，将溶液转移至OasisHLB柱，弃去流出液，用5 mL水和5 mL甲醇水溶液(3.9)依次洗涤，弃去流出液，负压抽干，8 mL甲醇洗脱，收集全部洗脱液，在50℃以下水浴减压浓缩至近干，用1.0 mL甲醇-水(3.10)定容，混匀，将溶液通过0.45 um滤膜，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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