4.3 仪器和设备

4.3.1 恒温培养箱：(26±1)℃，搁板必须水平。

4.3.2 震荡培养箱：(30±1)℃。

4.3.3 培养皿：内径90 mm、底部平整光滑的玻璃皿或塑料皿，配陶瓦盖，或玻璃盖内嵌入干燥的滤纸。

4.3.4 牛津杯：不锈钢圆筒，外径(8.0±0.1) mm，内径(6.0±0.1)mm,高(10.0±0.1) mm。

4.3.5 游标卡尺：测量范围0～200 mm,精度0.02 mm。或抑菌圈测量仪。

4.3.6 均质器：不低于8000r/min。

4.3.7 离心机：不低于4000r/min。

4.3.8 半对数坐标纸。

4.4 测定步骤

4.4.1 样液制备

称取试样约10g(精确至0.1g)，置于均质杯中，加入10.0 mL磷酸盐缓冲液(4.2.1)，小心搅匀。放置60 min后，于8000～10000r/min均质2 min，移入离心管中，于4000r/min离心20 min，取上清液作为样液。

4.4.2 菌悬液制备

将试验菌种(4.2.2)接种于装有培养基I的试管中，于(30±1)℃培养24 h。吸取约1 mL该培养物接种于装有50 mL培养基I的锥形瓶中，于(30±1)℃震荡培养18～20 h。此培养物即为菌悬液，贮于4℃冰箱中可使用1周。

4.4.3 检定平板的制备

制备前，先预测一下藤黄微球菌悬液的最佳用量。方法是先用不同量的菌悬液加到培养基Ⅱ中，经培养获得适当大小(用0.10 ug/mL竹桃霉素标准工作液时直径在16 mm以上)且清晰的抑菌圈，菌悬液的该加入量即为最佳用量。

平板制备时，先向培养皿中加入20 mL融化的培养基Ⅱ，保持水平，待其凝固。将最佳用量的菌悬液加入到事先融化并冷却至45～50℃的培养基Ⅱ中，充分混匀后，向每个培养皿中基层琼脂上加4 mL,使其均匀分布，并保持水平，凝固后即为检定用平板。所用平板需当天制备。

4.4.4 标准曲线的绘制

按照SN 0179-92中6.1进行，但标准工作液用4.2.6中所制备的一组标准工作液。

4.4.5 样液的测定

每份样液用3个检定平板。在每个平板上置6只牛津杯，使其在半径约28 mm的圆周上呈60^o角均匀分布，间隔注满样液和0.10 ug/mL的竹桃霉素标准工作液。于(26±1)℃培养(17±1)h。翻转平板，除去牛津杯。如有抑菌圈产生，精确测量其直径。

4.5 结果计算和表述

在3个检定平板上，各浓度竹桃霉素标准工作液均出现适当大小的清晰抑菌圈时，如样液抑菌圈直径的平均值＜10 mm，即报告试样中竹桃霉素残留为“阴性”。如样液抑菌圈直径的平均值≥10 mm，经校正后从标准曲线上查出相应的竹桃霉素浓度值，再用式(1)计算出试样中竹桃霉素残留含量。

式中：X—试样中竹桃霉素残留含量，mg/kg ;

c—于标准曲线上查出的样液中竹桃霉素浓度值，ug/mL;

m—最终样液所代表的试样的质量浓度，g/mL。

注：如测定结果呈阳性，必要时尚需进行确证试验，以证明抑菌物确系竹桃霉素。

5 测定低限和回收率

5.1 测定低限

本方法的测定低限为0.05mg/kg。

5.2 回收率

猪肉中竹桃霉素添加浓度及其回收率实验数据：

在0.05 mg/kg时，回收率为71.3％；

在0.1 mg/kg时，回收率为89.7％；

在0.2 mg/kg时，回收率为91.7％。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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