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食品中海洋生物毒素的预防与检测

发布时间:2019-05-06 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:759

海洋生物毒素一般都具有较好的热稳定性,不能通过基本的烹饪手段消除毒性,所以说目前尚没有有效的预防甚至治疗手段。若要做到预防海洋生物毒素的侵害,就要做到:①学会科学的食用方法;②在沿海地区加强宣传,使群众认识各种有毒海洋生物、了解海洋生物毒素的毒性,尽量避免误食中毒;③检疫部门做好检查工作,不让有毒海产品流人市场;④加紧研发快速、有效、便捷的检测方法。

目前海洋生物毒素的检测方法基本上可分为两大类:生物学检测法和化学分析法。其中生物学检测法主要包括小鼠生物法、细胞检测法、免疫分析法和受体分析法等。而化学分析法则是基于各种化学仪器来分析生物毒素的方法,主要包括毛细血管电泳法、高效液相色谱法和色谱质谱联用法等。

①生物学检测方法。小鼠生物测定法(mouse bioassay, MBA)是众多生物检测方法里面最常用的一类海洋贝类毒素的检测方法。具体方法为:用丙酮提取分离出样品中的毒素,经过浓缩后用1%的生理盐水溶解,注射到小鼠的体内,观察24~48h内小鼠的存活情况来检测毒素的毒性。该方法的优势在于操作比较简单,无需昂贵的设备及毒素标准物质。该方法也是目前我国检测DSP、PSP和NSP的官方推荐方法。缺点在于耗时,检测限较高,重复性也不是很好。

细胞检测法(cell bioassay, CBA)是基于海洋生物毒素与细胞相互作用而产生特异反应来检测海洋毒素的一种生物检测方法。细胞检测法的原理是通过配体与受体的特异性结合将化学信息转化成确定的细胞反应。以DSP毒素为例,冈田软海绵酸能对蛋白磷酸酶2A(PP2A)产生特异性抑制作用,因此可以利用这一特点开发定量检测方法,如直接比色、荧光分析和电化学分析等,检出限可达0.2nmol/L。而且很多种细胞都可以用来检测DSP毒素,例如,神经细胞株Neuro2a,肠上皮细胞Caco-2,人肝癌细胞HepG2等。细胞检测法能直观体现某一类毒素的整体毒性,并且可以减少实验动物的实验,而且具有高通量等优点,因此有望发展成一门可以替代小鼠生物法以及其他化学分析法的补充检测方法。

免疫分析法是基于抗体可以与抗原或化合物特异性结合的原理而发展起来的一门生物检测技术,主要包括酶联免疫吸附法(ELISA),横向流动免疫测定(LFIA)和以表面等离子体共振的生物传感器(SPR)。其中酶联免疫吸附法是最常用的一种检测形式,可用于检测多种海洋毒素,目前以ELISA方法检测短裸甲藻毒素已被美国官方认可。已经有多种市售的毒素检测试剂盒,并且在检测某种毒素方面有着比较好的结果与应用。杜伟等用小鼠生物法与ELISA法检测麻痹性贝类毒素,通过对比发现,在方法检出限以内的范围,小鼠生物法与ELISA法检测结果有较好的吻合度,ELISA法检测结果略小于小鼠生物法,主要原因是小鼠生物法检测的是样品中PSP总量,而ELISA能检测单一的毒素。而且ELISA法更适合批量检测,这样才能降低检测成本。总之免疫分析法由于其灵敏度高、特异性强、操作较简单而备受欢迎,但是由于毒素抗体比较难获得,因此相对来说所能检测的毒素种类比较少且成本较高。并且由于毒素的种类很多而且每一类毒素又包括很多种结构,因此该方法用于日常监测方面尚有不足。

②化学分析方法。毛细管电泳检测法是一类结合电泳和色谱的新型检测技术,即用毛细管作为分离通道,用紫外、荧光、二极管阵列等作为检测器对样品进行检测。毛细管电泳需要的样品量非常少,通常只需要几纳升即可满足检测需要。BouaichaE55E最先使用毛细管电泳以紫外检测器检测毒素的吸收情况来检测贻贝中的冈田软海绵酸(OA)和鳍藻毒素(DTX-2),但是由于缓冲液选择不佳以及毒素的紫外吸收能力比较弱,因此其检测限和特异性也受到限制。而后各国科学工作者对该方法进行不断改进,通过结合了毛细管电泳法和质谱检测的优势,建立起了具有高分辨率和高灵敏度的毛细管电泳检测法,使其在毒素检测中具有很好的应用潜力。

高效液相色谱分析法(high performance liquid chromatography, HPLC)由于其为集分离与检测为一体,具有灵敏度高、专一性强,且分析时间短等优点,被广泛应用到很多化合物的检测中。与生物学检测方法相比,除了以上优点外,还能通过分析得到更多的毒素信息,以及组分的具体含量和毒性。因此用HPLC检测海洋生物毒素成为该领域的一个热点,美国分析化学家协会更是将其列为PSP和DA的官方推荐检测方法。HPLC-FD检测方法对于含生色基团的化合物来说具有很大的优势,但是由于很多毒素缺乏生色基团,例如,HPLC法检测DSP时,需要使毒素分子与荧光物质反应带上一个荧光基团后再用于检测,但是这种方法比较耗时。Diener等,71开发出离子对色谱-荧光检测方法用于检测石房蛤毒素(STX)等麻痹性贝类毒素,该法不用修饰毒素分子即可用于分析检测,而且检出限很低,可以用于量化食品中的毒素含量。

色谱质谱联用技术(LC-MS)是结合了色谱和质谱优点的一门新型检测技术,色谱的优势在干能将化合物高效分离,用标准物质作为参照来判断未知物的含量,但是难以获得物质的结构;质谱的优势在于定性能力强,在多组分痕量分析中具有分辨率高的特点,能获得物质的结构信息,但是需要对样品进行纯化处理,二者的结合则正好弥补了各自的缺点。与HPLC分析法相比,LC-MS/MS不需要复杂的衍生和样品纯化过程,且能检测的范围更广,检测限更低,因此近年来液相色谱和质谱联用分析法对于海洋毒素尤其是脂溶性毒素的研究越来越多。2014年1月,欧盟规定该方法正式取代小鼠生物法作为DSP检测的官方推荐方法。化学分析法的缺点是不能检测出新的毒素,因此也无法完全取代生物功能性检测方法在海洋毒素检测与分析中的应用研究。

生物传感器是以生物化学和传感器技术为基础的生物分析检测方法,利用功能性的生物体或者生物大分子(如酶、抗体、抗原或细胞)等作为一级识别元件,通过二级换能器将生物分子识别的信号转换成可以测量的电信号或者化学信号等。比如青蛙的膀肌膜上有丰富的Na+通道,用青蛙膀胧膜覆盖钠离子电极,使之形成一个流动的细胞。然后对Na+的运输进行研究,可以用于毒素的检测。生物传感器自出现以来,由于具有很好的灵敏度和特异性,易操作并且容易实现小型化等优点,使其在海洋毒素检测中的应用越来越受关注。

相关链接:海洋生物毒素(二)

文章来源:《食品安全中的化学危害物》

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