6 试样的制备与保存

6.1 试样的制备

将液体、浆状、粉状的样品充分混合均匀；将低温保存的固体样品进行粉碎磨细后供检测。必要时将实验室样品用四分法进行缩分。

根据样品的性状和保存要求将样品保存在适当的环境中避免变质。

6.2 试样的保存

将试样于-20℃冰箱中保存备用。

7 测定步骤

7.1 提取

称取约2.5g～5.0g试样(蜂王浆称量5.0g±0.2g；冻干粉称量2.5g±0.2g)于50 mL离心管中，分别添加氘代标示物HMMNI-D3、IPZ-OH-D3(4.7)100 uL,加入20 mL乙酸钠缓冲溶液(4.10)充分涡旋振荡提取1 min。

再加入20 mL乙酸乙酯，经过涡旋、液-液萃取，将乙酸乙酯层全部移入鸡心旋蒸瓶，重复上述操作，合并三次乙酸乙酯提取液于鸡心旋蒸瓶，在40℃以下浓缩近干，除去溶剂。

7.2 净化

鸡心旋蒸瓶残渣用1 mL四氯化碳和1 mL甲酸水溶液(4.11)溶解，充分涡旋1 min。吸取上层水溶液，用微孔过滤膜(0.2um)过滤，此为试验溶液。

7.3 色谱测定

7.3.1 液相色谱参考条件

a)色谱柱：Waters Sunf ire ODS C₁₈,5um,250 mm×4.6mm(内径)或相当者；

b)柱温：30℃；

c)流动相：0.1％甲酸水溶液；液相梯度见表1;

d)流速：800 uL/min;

e)进样量：10 uL。

表1 液相色谱流动相梯度表

7.3.2 质谱参考条件

a)离子源：大气压化学电离源(或与之等效电离源)；

b)扫描方式：正离子扫描；

c)检测方式：多反应离子监测(MRM) ;

d)电喷雾电压(IS):5250V;

e)雾化气(NEB)相对开放流量：14.00 mI,/min;

f)气帘气(CUR)相对开放流量：7.00 mL/min;

g)离子源温度(TEM) : 500℃；

b)碰撞池出口电压(CXP) :11V;

i)选择离子驻留时间(Dwell) : 50 ms;

J)碰撞池入口电压(EP): 10.0V;

k)碰撞气(CAD)相对开放流量：8 mL/min;

1)辅助气流压力：413.8 kPa;

m)去簇电压(DP)：35V;

n)焦环聚焦电压(FP)：200V;

o)喷雾器放电针电流(NC)：2 uA;

P)检测器参数(正离子化模式)，离子流转向电压(DF):-200.0V；检测器脉冲信号增强电压(CEM)：2300.0V；

q)定性离子对、定量离子对、碰撞气能量、色谱峰保留时间见表2。

表2 硝基咪唑类药物中英文名称、定性离子对、定量离子对、碰撞气能量、色谱峰保留时间

7.3.3 液相色谱-串联三重四极杆质谱测定

7.3.3.1 定性测定

被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同试验条件下，样品中待测物保留时间与标准溶液中保留时间偏差在±2.5％之内；且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表3规定的范围，则可判断为样品中存在对应的待测物。

表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

7.3.3.2 定量测定

在仪器正常工作条件下，对基质混合标准工作溶液(4.12)进样，以标准溶液中被测组分峰面积为纵坐标，标准溶液中被测组分浓度为横坐标绘制工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内，超过线性范围则应适当稀释后再进行分析。方法采用外标法定量。

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。