1 范围

本标准规定了蜂王浆及冻干粉中甲硝唑、地美硝唑、替硝唑、洛硝唑、特尼哒唑、异丙硝唑，以及羟基化甲硝唑、轻基化异丙硝唑、2-羟甲基-1-甲基化-5-硝咪唑等9种硝基咪唑类药物残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于蜂产品(蜂王浆、冻干粉及蜂蜜)中硝基咪唑类药物残留量的测定。

本标准蜂王浆样品的方法检出限：0.5ug/kg。

本标准冻干粉样品的方法检出限：1.0ug/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1-2004,ISO 5725-1:1994,IDT)

GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379.2-2004,ISO 5725-2:1994,IDT)

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-2008,ISO 3696:1987,MOD)

3 原理

本方法用乙酸钠缓冲液溶解样品基质，乙酸乙酯进行液-液萃取，经过旋转蒸干后，加入四氯化碳和含酸水溶液，离心后取上层溶液，运用液相色谱串联三重四极杆质谱仪(LC-MS-MS)进样检测。

4 试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 乙腈：色谱纯。

4.2 甲醇：色谱纯。

4.3 乙酸乙酯：色谱纯。

4.4 甲酸：色谱纯。

4.5 四氯化碳。

4.6 乙酸钠。

4.7 标准品：甲硝唑(metronidazole，缩写MNZ; CAS: 443-48-1)，地美硝唑(dimetridazole，缩写DMZ;CAS:551-92-8)，替硝唑(tindazole，缩写TNZ; CAS: 19387-91-8)，洛硝唑(ronidazole，缩写RNZ; CAS:7681-76-7)，特尼哒唑(ternidazole,缩写TerNDZ)，异丙硝唑(ipronidazole，缩写IPZ) ,羟基化甲硝咪唑(metronidazole-OH，缩写MNZ-OH),羟基化异丙硝唑(ipronidazole-OH，缩写IPZ-OH), 2-羟甲基-1-甲基化-5-硝咪唑(2-hydroxymethyl-l-methyl-5-nitro-imidazole，缩写HMMNI)，以上标准物质纯度≥98%。内标物为氘代2-羟甲基-1-甲基化-5-硝咪唑(HMMNI-D3; CAS:8061-52-7),氘代羟基化异丙硝唑(IPZ-OH-D3;CAS:8061-52-7),氘代物质纯度≥95％。

4.8 标准储备溶液：1000 ug/mL。准确称取10.0 mg±0.05 mg各标准物质，用甲醇溶解于10 mL棕色容量瓶中(可放置于超声波清洗器数分钟促进溶解)，定容后配成浓度为1000ug/mL的标准储备液。将储备液置于-20℃冰箱中保存备用。

4.9 标准中间溶液：100ng/mL。可将标准储备溶液(4.8)室温下放置5 min，使用时用乙腈稀释至所需浓度，临用临配。

4.10 乙酸钠缓冲溶液：0.1 mol/L。准确称取8.204 g无水乙酸钠，加入5.83mL冰乙酸定容到1000 mL容量瓶中，超声混合并脱气15 min后，于液相色谱流动相瓶中备用。

4.11甲酸水溶液：0.1％。准确移取1 mL甲酸，用水定容到1000 mL容量瓶中，超声混合并脱气15 min后，于液相色谱流动相瓶中备用。

4.12 基质混合标准工作液：根据标准物质的灵敏度和仪器线性范围，吸取一定量的中间浓度混合标准液(4.9)，用空白样品提取液配制成系列浓度的基质混合标准工作液。临用临配。

4.13 滤膜：0.2 um。

5 仪器

5.1 液相色谱-串联三重四极杆质谱仪(LC-MS-MS)：质谱仪配有大气压化学电离源(或与之等效电离源)；高效液相色谱配有在线脱气机、低残留自动进样器、可控温柱温箱和高精度混合泵。

5.2 电子分析天平：感量0.1mg和10mg。

5.3 冷冻离心机：速度可达4000r/min和13000r/min。

5.4 氮吹仪：水浴和加热控温。

5.5 台式分散仪。

5.6 旋转浓缩仪：带真空蒸发和循环冷却水。

5.7 超纯水器。

5.8 超声波清洗器。

5.9 多功能食品粉碎机。

5.10 旋涡混合仪。

5.11 鸡心瓶：125 mL。

5.12 离心管:15 mL和50 mL；聚四氟乙烯材质。

5.13 容量瓶：10 mL和1000mL。

相关链接：蜂王浆中三甲氧苄氨嘧啶残留量的测定（三）

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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