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高效液相色谱仪的分离系统及检测系统

发布时间:2014-06-30 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:1275

色谱柱是高效液相色谱仪的核心部件。柱效高、选择性好、分析速度快是对色谱柱的一般要求。分析用的色谱柱长一般为lO~50cm,内径为2—5mm,制备用的色谱柱内径可达25mm。用不锈钢或硬质玻璃制成直形柱管,使用玻璃柱要注意它的耐压强度。色谱柱的两端装有烧结不锈钢或多孔聚四氟乙烯过滤片。在色谱柱前通常还配有前置柱,柱内的填充物和分析柱相同,但粒度较大,其目的是除去流动相中的杂质,以避免分析柱被沾污;同时又可使流动相预先被前置柱中的固定液所饱和,以减少流动相在流过分析柱时洗脱其中的固定液,起到防止固定液流失的作用。

由于柱技术的发展,内径小于2mm的色谱柱应用已经越来越多,微径小柱的发展又促进了色谱仪器向更高压力、更加快速的方向发展。因为用于微径小柱的固定相颗粒与常规HPLC柱的固定相颗粒相比要细而均匀得多,这对液相色谱仪器的各个方面提出了更高的要求,从而产生各种超高压的液相色谱仪器,如waters公司的UPLC和Agilent公司的超高压HPLC仪器。

检测系统
     HPLC仪对检测器的要求与气相色谱仪完全相同,其中主要是死体积要小、噪声要小、基线要稳、灵敏度要高。
     l.HPLC检测器的分类
     常用的检测器一般分为两类:通用型检测器和专用型检测器。
     (1)通用型检测器

通用型检测器可连续测量色谱柱流出物的全部特性变化,通常采用差分测量法。这类检测器有示差折光检测器、蒸发光散射检测器、介电常数检测器、电导检测器和近年来发展的磁光旋转检测器等。通用型检测器适用范围广,但由于对流动相有响应,因此易受温度变化、流动相流速和组成变化的影响,噪声和漂移都较大,灵敏度较低,一般不宜用于梯度洗脱。质谱检测器是最好的通用型检测器,由于接口技术的改进及其本身的特点,没有普通的通用型检测器的上述缺点。质谱检测器详见HPLC/MS联用技术介绍。

(2)专用型检测器

专用型检测器用以测量被分离样品组分某种特性的变化。这类检测器对样品中组分的某种物理或化学变化敏感,而这一特性是流动相所不具备的,或至少在操作条件下不最示。这类检测器包括紫外检测器、荧光检测器、极谱检测器、放射性检测器等。

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