按光学系统区分为单波长单光束分光光度计、单波长双光束分光光度计、双波长双光束分光光度计三类，分别代表了低、中、高三档分光光度计。按适用波长范围区分为两类，即可见分光光度计及紫外可见分光光度计。目前，应用最广的是双光束分光光度计，下面作重点介绍。

1．单波长双光束分光光度计

一般的单光束分光光度计每换一个波长都必须用空白进行校准，测定吸收光谱较麻烦(用计算机技术实现自动扫描的除外)，且对光源和检测系统的稳定性要求较高。双光束分光光度计增加了一个斩波器，固定了参比池、样品池在光路中的位置。当从色散系统获一束平行单色光经斩波器时，斩波器以一定频率把一个光束交替分成两路，一路通过样品，另一路通过参比，能自动比较透过空白和试样的光束强度，此比值即为试样的透射比。图5-11为单波长双光束分光光度计的光路示意图。

来自光源的光束经单色器1后，分离出的单色光经反射镜2分解为强度相等的两束光，分别通过样品池7和参比池6，在平面反射镜4和5的作用下汇合，投射到光电倍增管9上。斩波器8带动2和5同步旋转，两光束分别通过参比池6和样品池7，然后经4和5交替投射到光电倍增管9上。检测器在不同的瞬间接收、处理参比信号和试样信号，其信号差再通过对数转换成吸光度。

图5-11单波长双光束分光光度计原理图
1-单色器；2～5-反射镜；6-参比池；7-样品池；8-斩波器；9-光电倍增管

单波长双光束分光光度计大多设计为自动记录式，能自动扫描吸收光谱。另外，它还消除了电源电压波动的影响，减小了放大器增益的漂移。国产710、730、740型为此类型分光光度计。

2.双波长双光束分光光度计

当试样溶液浑浊或背景吸收大或共存组分的吸收光谱相互重叠有干扰时，宜采用双波长分光光度法进行测定。双波长分光光度计的光路简图见图5-12。

图5-12双波长双光束分光光度计检测系统

仪器在结构上有两个单色器、不用参比池，原理是两个单色器所获单色光，一个在浑浊样品波峰λl，另一个在浑浊样品波谷λ₂，由斩波器以一定频率交替照射到样品池，经检测、显示系统，最后测得样品对波长λ₁、λ₂吸光度差值，△A =A_λ1-A_λ2=(ε_λ1-ε_λ2)bc。由此可知，作为参比的是样品对某一波长吸光度，这样不仅避免了样品与参比吸收池光径差异引入的误差，更重要的是提高了灵敏度及选择性。尤其对不易找到参比物质的测定或吸光干扰较大的物质测定，以及浑浊样品测定，双光束双波长分光光度计也具有双光束单波长分光光度计所具有的可消除光源不稳、检测系统不稳带来的仪器误差，便于自动测定、直读、扫描等特点。国产WFZ800-S型双波长可见分光光度计属此类型。

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