1989年，美国Chiron公司Choo小组采用免疫筛选方法从一个来自慢性感染的黑猩猩血浆中成功克隆了丙型肝炎病毒（hepatitis C Virus, HCV）的部分cDNA，接着又从患者血浆中得到多个HCV克隆，从而首先将引起丙型肝炎的病原体分离出来。HCV是第一个使用现代分子生物学技术鉴别而在没有看到病毒颗粒条件下确认的人类病毒。HCV属于黄病毒科（Flaviviridae）的肝病毒属（Hepacivirus)，与黄病毒科中黄病毒属如登革热病毒、黄热病病毒等相似。

一、生物学特性

1．形态结构HCV呈球形，直径为30～60 nm，由包膜、衣壳和核心三部分组成。包膜来源于宿主细胞膜，其中镶嵌有病毒包膜蛋白；衣壳主要由核心蛋白构成；核心为一单正链RNA。

2．理化特性HCV颗粒浮力密度为1.03～1.20 g/cm³，在血清中可测范围含量在101～107 copies/mL。 HCV对各种理化因素的抵抗力较弱，对酸、热均不稳定。氯仿、乙醚等有机溶剂对HCV有较强的灭活作用。用1:100。的甲醛37℃作用4天、沸水煮5 min或加热60℃ 30 min，均可使其感染性丧失。血液或血液制品经60℃处理30 h后可完全灭活HCV。

3．基因组结构 HCV是一单正链RNA病毒，其基因组全长约9.6 kb，由5'与3’非编码区（non-translated region,NTR）及1个大的开放阅读框（ORF）组成。基因组的ORF编码一个约3000个氨基酸的多聚蛋白前体，这个前体蛋白通过宿主和病毒蛋白酶的裂解作用产生10个蛋白，结构蛋白包括C（核心蛋白）,El(包膜蛋白）,E2(包膜蛋白）及p7(跨膜运输蛋白），它们在病毒包装过程中起重要作用。核心蛋白还具有较强的抗原性，可刺激机体产生核心抗体，并几乎存在于所有患者血清中且持续较长时间，有助于感染的诊断。El和E2属于糖蛋白，与病毒进入宿主细胞有关。E区基因变异最大，在E2区还有一个高变区（hypervariable region 1, HVRl)，由于包膜糖蛋白抗原性改变而逃逸免疫细胞及免疫分子识别，这是HCV容易慢性化的原因。P7蛋白属于跨膜运输蛋白，具有离子通道作用。非结构蛋白包括NS2,NS3(蛋白酶和解旋酶),NS4A,NS4B,NS5A及NS5B（依赖RNA的RNA多聚酶），它们在病毒基因组复制过程中起重要作用。5'NTR位于ORF上游，其中存在一个内部核糖体进入位点（internal ribosome-entry site,IRES)，内含与蛋白质翻译起始有关的顺式作用元件，在HCV翻译调控中具有重要作用。3'NTR位于ORF的下游，由3个部分构成，即可变区、多聚嘧啶区及98 nt高度保守末端。实验证明，除了可变区，大部分3'NTR序列是HCV基因组复制不可或缺的成分。

4．分型HCV基因组核昔酸序列的变异超过30％时，定为不同的基因型(genotype)，同一个基因型内核苷酸序列变异超过20％时，定为亚型(subtypes)，在同一个个体分离的多个基因变异株（变异10％）被命名为准种（quasispecies)，准种主要是由于HCV在宿主中复制产生变异形成的。根据基因组序列，可将HCV分成至少6个主要基因型以及100多个亚型。其中HCV 1型分布具有全球性，占所有HCV感染的70％以上。HCV lb型和HCV 2a型在我国较为常见，其中以lb型为主，2a型次之。不同的基因型在临床上引起的疾病程度不同，药物治疗的效果也不一样。

5.敏感动物与细胞 HCV仅感染人和黑猩猩，黑猩猩是目前世界上唯一被广泛接受的动物模型，但其费用昂贵、物种濒危和伦理学上的争议，制约了黑猩猩的应用。替代模型有转基因小鼠模型及小型灵长动物树鼩。HCV具有明显的嗜肝性，Huh7.5是一个最理想的宿主细胞株，生长在Huh7.5细胞系的重组病毒能在黑猩猩和鼠模型体内产生感染性病毒，从这些动物体内分离的病毒在细胞培养时仍然具有感染性。

一、临床意义

HCV是丙型肝炎的病原体，丙型肝炎病毒全球性流行，约有1.7亿 HCV感染者，占世界人口的3％，每年新发丙型肝炎病例约3.5万例。80％以上的患者呈慢性感染。在发达国家HCV感染率较低，如德国仅为0.6％；在发展中国家普遍具有较高的HCV感染率，其中埃及高达22％。我国血清流行病学调查资料显示，一般人群抗HCV阳性率为3.2％,约有4000万人感染HCV。HCV传染源包括患者和隐性感染者，传播途径多种多样。①输血传播，如大量输血和血液透析等；②不安全的注射治疗传播，如使用非一次性注射器和针头（静脉注射吸毒）、未经严格消毒的牙科器械、内镜、侵袭性操作和针刺（如纹身）等；③围产期传播和性传播。HCV是引起慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌的主要原因，世界上大约27％的肝硬化患者和25％的肝细胞癌患者曾经是HCV感染者。

三、微生物学检查

HCV病毒颗粒在宿主外周血中的含量非常低，常规方法难以直接检测。目前临床实验室主要有两类方法：免疫学方法检测HCV抗体；分子生物学方法检测HCV RNA和进行基因分型。

1．标本采集采集血清或血浆标本进行免疫学检测；HCV RNA检测多采用血清，如采用血浆，应用EDTA或枸橼酸盐抗凝。标本在采集后应尽快分离血清或血浆。一般于4～6 h内冷藏或冻存，最好冻存在-70℃以下。

2．检验方法

(1)免疫学检测：①筛选实验：主要采用ELISA法或化学发光法，用重组或合成的HCV多肽包被抗原。ELISA试剂盒为第三代，以C22,C200(C33c和C100-3重组）和NS5区的蛋白为抗原，增加了抗-HCV检出敏感性和特异性，但仍不能排除在低危人群中会有假阴性和假阳性问题。在感染早期抗体产生前的窗口期，免疫功能低下的患者或器官移植后用免疫抑制剂的患者，易于出现假阴性结果，而一些自身免疫性疾病以及诸如原发性胆汁性肝硬化、系统性红斑狼疮等疾病时，易出现假阳性。按照美国疾病预防控制中心2003年抗-HCV报告和实验室检测指南，ELISA法检测抗-HCV仅在重复检测S/CO不小于3.8时才是真阳性，而对于S/CO不大于3.8者需做确认试验或核酸检侧。②确认实验，目前常用重组免疫印迹实验（recombinant immunoblotting assay, RIBA）来确认ELISA检测的结果。RIBA是将HCV重组抗原喷涂在硝酸纤维素薄膜条的不同位置，分别与待检血清和酶标抗体反应，通过显色判断。可明确看到抗体针对一个或多个抗原成分的反应结果。如果出现两条带或以上为阳性反应，则可确认试验为阳性。该实验主要用于ELISA初筛检测可疑者，能帮助区别特异性-HCV和非特异性反应。

(2)核酸检测（nucleic acid test,NAT)：血清或血浆HCV RNA的检测是目前唯一直接揭示HCV存在的实用方法。当血清学检测阳性或不能确定时，不管有无特异性临床症状或肝酶水平的改变，都必须进行HCV RNA检测。特别是对于感染早期体内抗体出现前的诊断以及疗效评价方面具有特殊价值。核酸检测方法主要有RT-PCR和bDNA，前者将靶序列（一般来自于HCV基因组的NTR区）逆转录为cDNA，再把cDNA进行扩增，用荧光探针实时定量测定；后者基于bDNA信号扩增系统，易于操作且适合定量。

(3)基因分型：可采用多种方法对HCV基因组不同部分进行HCV基因分型。基因分型的金标准是序列分析。常用的方法是利用来自核心区的型特异性引物进行RT-PCR,型特异性探针与扩增的5'非编码区进行杂交、NS5区的RFLP等。基因分型主要用于流行病学调查，也可用于预测治疗反应和指导抗病毒治疗的时间和剂量。

3．报告及解释 抗-FICV呈阳性表明HCV感染的可能性很高，患者标本中发现HCV RNA可以提示HCV的活动性感染。血清抗体产生之后，血清病毒量变得很低，经常低于RT-PCR，可检测到HCV RNA的最低限。因此，ELISA检测阳性而RT-PCR检测阴性不能排除HCV感染，而应随访并进一步检测。HCV RNA检测也可用于ELISA结果不能确定的HCV感染。抗体阳性而多次RNA检测阴性可能提示感染已经消除。