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一、杯状病毒
人类杯状病毒(human caliciviruses, HuCV)属于杯状病毒科、杯状病毒属,据形态学、遗传学和抗原性的不同分为两类,一类是诺瓦克样病毒(norwalk like virus,NV),另一类是萨帕罗病毒(sappovirus,SV)。
人类杯状病毒为球形,直径仅为27~38 nm,电镜下Norwalk病毒表面凹痕参差不齐,而Sappor。病毒带有32个杯状凹陷的表面。核心为单正链RNA,只有一种衣壳蛋白,核衣壳呈二十面体立体对称,无包膜。人类杯状病毒目前尚不能在体外细胞中培养,也无敏感动物模型。该病毒置于50℃ 30 min、经紫外线照射可以被灭活,耐乙醚。
人类杯状病毒通过粪-口途径传播,感染后引起小肠绒毛轻度萎缩和黏膜上皮细胞破坏。潜伏期为24 h,突然发病,发热、恶心、呕吐、腹痛、腹泻,预后良好。Norwalk病毒是世界上引起非细菌性胃肠炎爆发流行最重要的病原体之一,以冬季多见,可累及任何年龄,0~3月龄婴儿中有20%为Norwalk病毒抗体阳性,20岁以上人群中有50%为Norwalk病毒抗体阳性,但抗体的保护作用不明显。该病毒感染为自限性,预后良好。
目前实验室诊断主要通过电镜和免疫电镜技术检测患者粪便中的病毒颗粒,但敏感度较低,仅30%~50%患者粪便中可能检出病毒。由于分子诊断学的发展,可应用基因重组病毒表达的Norwalk病毒衣壳抗原,通过ELISA检测患者相应抗体,也可用RT-PCR法检测粪便和污染海产品(如牡蛎等)中的Norwalk病毒的核酸。
二、星状病毒
星状病毒(astrovirus)属于星状病毒科(Astrovirus)星状病毒属,包括人、哺乳动物和鸟类星状病毒。人星状病毒(human astrovirus)于1975年从婴幼儿腹泻粪便中分离得到。病毒呈球形,直径为28~30 nm,电镜下可见病毒颗粒表面有5~6个角,呈有鉴别意义的星状外形。核心为线状单正链RNA,编码5或6种衣壳蛋白。病毒难以在体外培养,在有胰酶存在条件下,某些培养细胞(如大肠癌细胞)可用于分离星状病毒,并产生CPE。
人星状病毒通过粪-口途径传播,易感者为5岁以下婴幼儿,病毒侵犯十二指肠黏膜细胞,造成细胞损伤和死亡,但病毒在人胃肠炎中的作用范围尚不清楚。病毒潜伏期为3~4天,主要临床症状为发热、恶心、腹泻,病程持续2~3天,但免疫功能低下的感染者病程延长。感染后可产生抗体,5岁以下儿童的抗体阳性率在70%以上。抗体具有保护作用。
在胃肠炎急性期,星状病毒在粪便中大量出现,用电镜或免疫电镜直接检测腹泻患者标本,后者尚可确定其血清型,也可用中和实验进行鉴定。用大肠癌细胞分离病毒,标本应经胰酶处理,而且培养液中也要加适量胰酶。观察CPE并经免疫电镜与中和实验进行鉴定与分型。
三、肠道腺病毒
腺病毒(adenovirus)是一类既能感染呼吸道,又能感染胃肠道的病毒,在分类上属于腺病毒科、哺乳动物腺病毒属,人类腺病毒(human adenovirus)目前有49个血清型,其中40,41,42型可引起人类的胃肠炎,称为肠道腺病毒(enteric adenovirus,EAd)。其主要通过胃肠道、呼吸道和密切接触在人群中传播,以夏季多见,常侵犯5岁以下的幼儿,潜伏期长,平均为10天,主要表现为腹痛、腹泻,稀水样便,很少有发热或呼吸道症状。也可通过手、污染物品传播到眼,主要感染儿童,引起结膜炎或角膜炎。腺病毒为双链DNA无包膜病毒,核衣壳呈二十面体立体对称,直径为80~110 nm,可在人胚肾和人胚肺原代细胞、多种传代细胞中增殖,出现细胞肿胀变圆,聚集成葡萄串状的典型CPE。腺病毒对乙酸和乙醚不敏感,但置于56℃30 min可被灭活。
于发病1~2天内采集标本,一般采集粪便或肛拭子,采集的标本用抗生素处理后立即接种于敏感细胞,或放置在-70℃冻存,粪便悬液可用负染电镜技术观察病毒颗粒,也可用特异性血清与标本共育,凝集成团后观察。肠道腺病毒(40,41型)仅对293细胞较为敏感,在其他细胞中不易分离。病毒在细胞中增殖可引起细胞变圆、胞质内颗粒增多、细胞变形拉丝、聚集成葡萄串状的典型CPE,若2周内仍无明显CPE,可盲传或重新分离。当细胞出现大部分死亡脱落时,即CPE达到3+~4+,将感染细胞冻融3次,经4℃下,2000 r/min离心10 min,收集上清液作为抗原,用血清学方法进行鉴定。常用的血清学实验有ELISA,CF,Hl及NT等。此外也可用免疫荧光法和ELISA检测病毒抗体,用PCR法检测病毒特异性DNA。
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