人类轮状病毒（human rotavirus, HRV）是引起婴幼儿急性胃肠炎的主要病原体，特别是A组轮状病毒是世界范围内婴幼儿重症腹泻最主要的病原休，也是婴幼儿死亡的主要原因之一。1973年澳大利亚学者Bishop等在急性非细菌性胃肠炎儿童十二指肠黏膜超薄切片中首次发现了HRV，现归类于呼肠病毒科。1983年我国病毒学家洪涛等发现了成人腹泻轮状病毒（adult diarrhea rotavirus, ADRV)

一、分类

轮状病毒属于呼肠病毒科（Reoviridae）轮状病毒属（Rotavirus)，根据病毒基因组结构和抗原性（VP6)将轮状病毒（RV）分为7个组（A～G)，其中A组RV的感染最为常见，主要引起婴幼儿腹泻，A组轮状病毒根据VP6又可分为4个亚组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅰ+Ⅱ、非Ⅰ非Ⅱ）。另外，A组轮状病毒根据其表面中和抗原VP7和VP4又可分为16个G血清型和27个P血清型。B组RV主要引起成人腹泻，故又称为成人腹泻轮状病毒（ADRV)；少数报告显示C组RV也可致人感染，但D～G等4组RV只引起动物腹泻。

二、生物学特性

该病毒颗粒为球形，直径为60～80 nm，二十面体立体对称，双层衣壳，无包膜。负染后在电镜下观察，病毒外形呈车轮状。核心含有病毒核酸和RNA合成酶，病毒核酸为双链RNA，约18550 bp，由11个基因片段组成。每个片段含一个开放阅读框架（ORF)，分别编码6个结构蛋白（VPl,VP2,VP3,VP4,VP6,VP7）和5个非结构蛋白（NSP1～NSP5)VPl～VP3位于核心，分别为病毒聚合酶、转录酶成分和与帽形成有关的蛋白。VP4和VP7位于外衣壳，决定病毒的血清型。VP7为糖蛋白，是中和抗原，VP4为病毒的血凝素，与病毒吸附到易感细胞表面有关，亦为重要的中和抗原。VP6位于内衣壳，带有组和亚组特异性抗原。非结构蛋自为病毒酶．或调节蛋白，在病毒复制中起主要作用。

轮状病毒的敏感细胞是小肠黏膜上皮细胞，由于此类高度分化的细胞培养十分困难，故培养轮状病毒常用的细胞为原代猴肾细胞和传代绿猴肾细胞。

三、临床意义

轮状病毒主要经粪一口途径传播，另外也可通过接触传播，临床上主要引起急性胃肠炎。该病毒呈世界性分布，A～C组轮状病毒能引起人类和动物腹泻,D～G组只引起动物腹泻。病毒侵入人体后在小肠黏膜绒毛细胞内增殖，致细胞溶解死亡，微绒毛萎缩、变短、变钝、脱落，取而代之的是腺窝细胞增生，分泌增加，导致严重腹泻，水、电解质大量丧失。

1. A组感染 A组HRV感染见于世界各地，温带地区以秋末冬初为主，俗称“秋季腹泻”。年长儿童和成人常呈无症状感染，四月龄至两岁婴幼儿常呈急性胃肠炎感染，占病毒性胃肠炎的80％以上，是婴幼儿死亡的重要因素之一。病毒侵入机体后，在胃肠道先被部分消化，失去外衣壳，裂解VP4，产生感染型亚病毒颗粒（infectious subviral particle,ISVP)，然后穿入小肠豁膜绒毛细胞内增殖，感染后8h就可查见由RNA和病毒蛋白形成的胞质融合体。动物实验和患儿活检标本显示HRV感染造成了微绒毛萎缩、变短、脱落和细胞溶解死亡，使肠道吸收功能受损；刺激腺窝细胞增生，使分泌功能加强。导致水和电解质分泌增加，重吸收减少，出现严重腹泻。此外，非结构蛋白P4 (NSP4)有毒素样作用，通过作用于钙离子通道而影响水的吸收。

感染后潜伏期为24～72 h，发病急，80％患儿先发热、呕吐和腹痛，随即频繁腹泻，每日10～20次，为淡黄色水样便或蛋花汤样酸性便或白色米汤样便，无黏液、脓血及恶臭。病程一般为2～6天。当婴幼儿的免疫功能低下时，急性胃肠炎可变为慢性，患儿粪便中长期排出病毒，而成为本病的传染源。另外A组HRV感染还可致新生儿坏死性小肠炎、婴幼儿肠套叠、肺炎、脑炎、脑膜炎。严重感染还可伴有突发性婴儿死亡综合征（sudden infant death syndrome)、雷耶（Reye）综合征、溶血性尿毒综合征、川崎（Kawazaki）病和克罗恩(Crohn)病等。其传染源为患者和无症状携带者，患者每克粪便中排出的病毒体可达1010个。

2. B组感染B组HRV的感染以年长儿童和成人多见，无明显季节性，多为自限性感染。其暴发流行仅见于我国大陆，1982-1983年，该组病毒在我国东北、西北矿区青壮年工人中引发了大规模霍乱样腹泻流行，患者数多达数十万人。B组HRV感染主要引起成人腹泻，潜伏期为38～66 h，起病急，呈黄色水样便，无黏液和脓血，每日腹泻5～10次，重者每日可超过20次，伴有腹痛、腹胀、恶心、呕吐、脱水、乏力等症状，病程为3～6天。

3. C组感染对人的致病性类似A组，但发病率很低。感染后机体可产生型特异性抗体IgM,IgG和SIgA，对同型病毒感染有保护作用，其中以肠道SIgA最为重要。抗体对异型只有部分保护作用，加上婴幼儿免疫系统发育尚不完善，SIgA含量低，所以病愈后还可重复感染。

四、微生物学检验

（一）检验程序

1．标本采集与处理发病早期采集粪便，患者每克粪便中排出的病毒体可达1010个，水样便可用吸管吸至塑料或玻璃容器中，密封后送实验室。称取粪便加PBS制成10％悬液，3000 r/min离心10 min，取上清液检测或冻存。

2．标本直接检查

(1)电镜和免疫电镜检查：取粪便悬液超速离心，取沉渣经醋酸钠染色电镜观察，或进行免疫电镜观察，由于病毒颗粒聚集而易被检出。电镜下常见病毒颗粒，大小为60～80nm，有双层壳，核心呈放射状，类似车轮排列，此为完整的病毒颗粒，也可见空心的或不完整病毒颗粒。

(2)抗原检测：常用ELISA双抗夹心法，用组特异性单克隆抗体（McAb)和亚组、血清型特异的McAb配合使用，可检出A组轮状病毒，并判定亚组和血清型。ELISA约有5％的假阳性，系粪便中类风湿因子所致，此假阳性可用阻断试验加以排除。也可选用胶乳凝集试验，以组特异性抗体附着乳胶颗粒，加粪便悬液进行凝集反应，其具有良好的特异性，但不及ELISA敏感，当粪便中含有大量病毒颗粒（大于107个／g）时，乳胶凝集试验才能出现阳性结果。

(3)病毒RNA聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）分析：抽提病毒RNA后，经PAGE硝酸银染色进行分析，根据A,B,C三组HRV 11个基因片段电泳位置的特殊分布图形进行判断。以A组HRV的11条RNA基因片段电泳为例，第一组包括1～4片段，第二组包括5～6片段，第三组包括7～9片段，第四组为10.11片段，所有A组HRV均具有相似的4，2，3：2型RNA图谱。而且根据A组RHV的第10,11片段在PAGE上的迁移率不同分为两型，即长型和短型。A组HRV的亚组I多属于10,11片段迁移率短型。

(4)核酸检测。

①核酸杂交：用地高辛等标记组特异性探针（VP6基因）或型特异性探针（VP4或VP7基因型特异性序列）检测轮状病毒RNA。

② PCR检测：由于扩增HRV的RNA基因片段，首先需要将特异RNA片段逆转录成cDNA，但粪便中存在某种抑制逆转录的物质，使该法的灵敏度受到一定影响。

（二）病毒分离培养

用传代非洲绿猴肾细胞（MA104）或原代猴肾细胞分离病毒，粪便标本除常规处理外，尚需用胰酶预处理（10 ug/mL)，并在培养液中也加入胰酶(0.5～1.0 ug/mL)，有利于轮状病毒的生长，37℃旋转培养。初次传代培养一般不出现CPE，经过几次传代培养后可出现CPE。