1．检验程序沙门菌检验程序见图16-2。

图16-2沙门菌检验程序

2．标本采集根据病种及病程不同采集不同的标本。①肠热症：第1,2周取血，第2、3周取粪便、尿液，全程均可取骨髓。②胃肠炎：可取粪便、呕吐物、可疑食物。③败血症：取血液。血清学诊断在病程不同时期分别采集2～3份血标本，检测抗体。

3．标本直接检查将患者标本或肉汤培养物直接用商品胶乳凝集试剂进行凝集试验，可快速检测沙门菌。

4．分离培养常用培养基有肠道选择鉴别培养基麦康凯（MAC）或伊红亚甲蓝(EMB),SS等以及强选择培养基（孔雀绿和亚硫酸铋琼脂等）。分离培养伤寒沙门菌，用亚硫酸铋琼脂效果较好，而其他沙门菌用孔雀绿琼脂效果较好。对菌量较少的标本，可用亚硒酸盐或四硫磺酸盐肉汤增菌。

(1）粪便及肛拭子标本：接种于SS和MAC，以提高标本检出率。

(2)血液和骨髓标本：先增菌培养，有菌生长后移种于血琼脂或SS, MAC平板，孵育18～24 h后，取可疑菌落涂片、革兰染色后镜检，报告结果，同时做系统鉴定。对增菌培养7天仍无细菌生长的报告阴性。

(3)尿液和体液标本：无菌采取中段尿、胆汁、脑脊液、胸腹水等，经3000 r/min离心30 min，取沉淀接种于增菌培养基、血平板、SS平板等培养基。

(4)可疑食物标本：研磨后加10倍量的无菌生理盐水混匀，接种于增菌培养基和SS平板。

5．鉴定

(1)初步鉴定：取可疑菌落鉴定到肠杆菌科（表16-2)。选用肠杆菌科分析系统继续鉴定或用手工法继续鉴定（表16-9)。

表16-9埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸菌属、爱德华菌属的鉴别

(2)最后鉴定：经生化反应鉴定到沙门菌属后，做血清学鉴定。按O抗原、Vi抗原、H第1相和H第2相的顺序做凝集试验。临床常见沙门菌95％以上属A～F组（群），临床最常用的诊断血清为10种血清组合，包括A～F多价O血清、Vi血清、4种O血清（O₂,O₄,O₇,O₉）和4种H(1相）血清（a,b,c,d)组成。先与沙门菌A～F组多价O诊断血清做玻片凝集，根据凝集结果再分别与代表每个0血清群的单价因子血清做玻片凝集，依凝集结果再选择性与第1相H、第2相H单价因子血清做玻片凝集，综合凝集结果按表16-8判断沙门菌的血清型。

玻片凝集注意事项：与多价诊断血清不凝集时，将待检菌制成浓厚菌悬液，隔水加热100℃15～30 min，冷却后再做凝集试验，煮沸处理能破坏vi抗原；如多价诊断血清不凝集且vi抗原阴性者不考虑沙门菌；仅单相H（第1相或第2相）凝集时，需用位相分离的方法诱导出另一相抗原，再进行凝集试验；血清学难以区分的如C组，需进一步做全面生化
反应。

6．血清学诊断肠热症病程长，目前使用抗生素普遍，症状常不典型，临床标本细菌分离阳性率低，故检测抗体（血清学试验）协助诊断意义较大。血清学试验有肥达试验(Widal test)、间接血凝法、ELISA法等，其中肥达试验应用较为普遍。

肥达试验是用已知伤寒沙门菌菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原及甲型副伤寒沙门菌H抗原、乙型副伤寒沙门菌的H抗原（诊断菌液）与受检血清做定量凝集试验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价。肥达试验结果的解释必须结合临床表现、病程、病史以及本地区流行病学情况。

(1)正常值：因沙门菌隐性感染或预防接种，正常人血清中可含有一定量的沙门菌抗体，其效价有地区差异。若伤寒沙门菌O凝集效价≥1:80, H凝集效价≥l:160，副伤寒的沙门菌H凝集效价≥1:80才有诊断价值。

(2)动态观察：有时单次效价增高不能定论，可在病程中逐周复查。若效价逐次递增或恢复期效价比初次大于或等于4倍有意义。

(3) O与H抗体的诊断意义：O抗体为Igm类抗体，出现较早，持续约半年，消失后不易受非特异病原刺激而重现。H抗体是IgG类抗体，出现较晚，持续时间可长达数年，消失后易受非特异性病原刺激而短暂升高。因此，O, H凝集效价均超过正常值时，肠热症的可能性较大；如两者均低，肠热症可能性较小；如O高H不高，可能是感染早期或与伤寒沙门菌O抗原有交叉反应的其他沙门菌（如肠炎沙门菌）感染；若O不高H高，有可能是预防接种或非特异性回忆反应。

(4)其他：有少数病例，在整个病程中，肥达试验始终在正常范围内。其原因可能是早期使用抗生素或免疫功能低下等。