（一）肠道外感染

1．标本采集可采取血液、尿液、痰、脓液和分泌物等标本。

2．标本直接检查脓汁直接涂片或正常无菌性标本增菌培养后直接涂片，如发现较纯的革兰阴性杆菌，可初步报告形态、染色性，供临床用药参考。

3．分离培养无菌部位标本可用血琼脂平板分离培养，血液、脑脊液标本增菌后接种血平板。有正常菌群污染标本，可接种于肠道选择鉴别培养基。尿路感染标本尚需作尿中细菌总数测定。菌落数大于或等于105 CFU / mL时有诊断价值。

4．鉴定在肠道选择鉴别培养基上选择疑似大肠埃希菌菌落（EMB平板菌落为扁平、紫红或紫黑色、有金属光泽；MAC平板粉红或红色菌落）进行鉴定。

(1)初步鉴定：凡符合表16-5所示结果的革兰阴性杆菌，可初步鉴定为大肠埃希菌。

表16-5大肠埃希菌初步鉴定

注：A表示酸；K表示碱；C表示枸橼酸盐利用试验。

(2)最后鉴定：必要时可作系列生化反应（表16-6)，亦可用肠杆菌科鉴定试剂盒，根据反应结果编码作出最后鉴定。

表16-6埃希菌属内各菌种的鉴别

（二）肠道内感染

1．标本腹泻及食物中毒患者取粪便、肛拭子或剩余食物。

2．鉴定将粪便标本接种于肠道选择鉴别培养基。菌落鉴定为大肠埃希菌后，再分别检测不同类型肠道致病性大肠埃希菌的肠毒素、毒力因子和血清型（表16-7）等特征。

(1) ETEC：检测不耐热肠毒素（LT）和耐热肠毒素（ST)，可用生物学方法、细胞培养法、免疫学方法及分子生物学方法。

(2) EPEC：取5～10个乳糖阳性的大肠埃希菌菌落，与特异性O,H抗血清进行特异性凝集试验(O: H分型）。亦可用ELISA法、细胞培养法和DNA技术检测SPEC。

(3) EIEC：与志贺菌相似，多数无动力，乳糖不发酵或迟缓发酵。主要鉴别试验是葡萄糖铵利用试验、醋酸钠和黏质酸盐产酸试验，大肠埃希菌三者均为阳性，志贺菌三者均为阴性。毒力试验可将菌悬液接种于豚鼠眼结膜囊内，出现典型的角膜结膜炎症状，角膜上皮细胞内有大量细菌生长，为毒力试验阳性。

(4) EHEC:所有血便标本均应常规作O₁₅₇:H₇的培养，肠道正常菌群的大肠埃希菌80％经37℃孵育小于24 h发酵山梨醇，但O₁₅₇:H₇不发酵（或缓慢发酵）山梨醇。可用山梨醇麦康凯琼脂（(SMAC）经35～37℃孵育24～48 h,筛选不发酵山梨醇的菌落，次代培养后可用胶乳凝集试验检测O₁₅₇。凡山梨醇阴性的大肠埃希菌O₁₅₇:H₇菌株无需再做毒素测定（几乎均产生Vero毒素）。

(5) EaggEC：一群不产生LT或ST，没有侵袭力，不能用O:H血清分型，可黏附于Hep-2和HeLa细胞的大肠埃希菌菌株，该菌与世界各地慢性腹泻有关。可致儿童肠道感染，引起水样腹泻,呕吐和脱水，偶有腹痛、发热和血便。

以上5种类型大肠埃希菌的致病特征见表16-4。

表16-7肠致病性大肠埃希菌O血清群及血清型