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奈瑟菌属(Neisseria)是一群革兰阴性双球菌,有菌毛,无鞭毛,无芽胞,需氧,产生氧化酶和触酶。
一、分类
奈瑟菌属包括脑膜炎奈瑟菌(N.meningitides) ,(N.gonorrhoeae)、干燥奈瑟菌(N.sicca)、浅黄奈瑟菌(N.suhflava)、金黄奈瑟菌(N.flaveseens) ,黏液奈瑟菌(N.mucosa)等。奈瑟菌属DNA的G+C的摩尔分数为46%~54%。人类是奈瑟菌属细菌的自然宿主,只有脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌对人类致病。除淋病奈瑟菌寄居于尿道黏膜外,其他奈瑟菌均寄居于鼻咽腔黏膜。
二、生物学特性
1.形态与染色革兰阴性双球菌,单个菌体呈肾形或蚕豆形,成双排列,凹面相对,直径为0.6~0.8 mm。人工培养后可呈卵圆形或球状,排列不规则,单个、成双或4个相连等。孵育24 h后常呈现衰退形态,菌体大小不一,着色亦深浅不匀。在患者脑脊液或脓汁标本中,脑膜炎奈瑟菌多位于中性粒细胞内,形态典型,但在慢性淋病患者,淋病奈瑟菌多位于细胞外。多菌株有荚膜和菌毛。
2.培养特性脑膜炎奈瑟菌营养要求较高,需在含有血清、血液等培养基中方能生长,最常用的是巧克力琼脂。淋病奈瑟菌营养要求比脑膜炎奈瑟菌高,只能在巧克力琼脂平板和专用选择培养基中生长。需氧、嗜二氧化碳,初次分离培养需5%~10% CO2环境,最适温度为35~37℃,低于30℃不生长。最适pH7.4~7.6。巧克力平板35℃孵育24 h(多需培养48 h)后,形成直径1.0~1.5 mm的无色、圆形、光滑、透明,似露滴状的菌落。在血琼脂平板上不溶血。在血清肉汤中呈混浊生长。能产生自溶酶,人工培养物如不及时转种,超过48 h常死亡。
3.生化反应氧化酶和触酶阳性,大多数脑膜炎奈瑟菌分解葡萄糖和麦芽糖,产酸不产气,淋病奈瑟菌只分解葡萄糖(表15-1)。
表15-1常见革兰阴性球菌鉴别
注:MTM表示淋病奈瑟菌改良选择性培养基;V表示可变。
4.抵抗力对理化因素的抵抗力很弱。对寒冷、紫外线、干燥、热力、消毒剂等敏感。在室温中3h即死亡。对1%石炭酸、75%乙醇或0.1%新洁尔灭均敏感。
三、临床意义
(一)脑膜炎奈瑟菌
1.致病物质包括荚膜、菌毛和内毒素。荚膜能抗吞噬作用,菌毛可黏附至咽部黏膜上皮细胞表面,脑膜炎奈瑟菌的主要致病物质是内毒素。病菌在繁殖的同时因自溶或死亡释放出内毒素。内毒素作用于小血管和毛细血管,引起坏死、出血,出现皮肤淤斑和微循环障碍。败血症时细菌在血流中大量繁殖,因大量内毒素释放可造成DIC或中毒性休克。
2.所致疾病脑膜炎奈瑟菌是流行性脑脊髓膜炎(流脑)的病原菌。目前我国流行的主要为A群,占95%以上。近年亦发现B群病例,其病情重,死亡率高。此外,也有C群菌株引起流脑的报道。
病菌主要通过飞沫侵入人体的鼻咽部,潜伏期为2~3天,长者可达10天。临床上分为3种类型。①普通型:占90%左右,先有上呼吸道炎症,继而病菌从鼻咽部黏膜进入血流,到达脑脊髓膜,引起化脓性炎症。②暴发型:见于少数患者,多起病急、病情凶险,若不及时抢救,常于24 h内危及生命。③慢性败血症型:不多见,主要为成人患者,病程可迁延数日。普通型和暴发型以儿童摧患为主。
(二)淋病奈瑟菌
1.致病物质淋病奈瑟菌进入尿道后,通过菌毛黏附到柱状上皮细胞表面,不易被尿液冲去,在局部形成小菌落后,再侵入细胞内增殖。外膜蛋白PI工可直接插入中性粒细胞细胞膜上,破坏膜结构的完整性,导致膜损伤。外膜蛋白Ⅱ分子参与淋病奈瑟菌间以及菌与一些宿主细胞间的黏附作用。外膜蛋白Ⅲ则可阻抑杀菌抗体的活性。此外,淋病奈瑟菌尚能产生IgAl蛋白酶,能破坏黏膜表面特异性lgAl抗体,利于菌体黏附至黏膜表面。
2.所致疾病人类是淋病奈瑟菌的唯一宿主,主要通过性接触传播。淋病奈瑟菌侵入尿道和生殖道而感染,其潜伏期为2~5天。成人感染初期,男性一般引起前尿道炎,女性表现为尿道炎与子宫颈炎。主要表现为排尿刺痛、尿道口红肿、尿道流脓、宫颈可见脓性分泌物等。如不及时治疗,病菌可扩散到生殖系统,引起慢性感染,男性发生前列腺炎、精囊精索炎或附睾炎;女性出现前庭大腺炎和盆腔炎等,是不孕、不育的原因之一。
母体患有淋菌性阴道炎或子宫颈炎时,婴儿出生时可得淋菌性结膜炎,眼部出现大量脓性分泌物,如治疗不及时可致盲,
四、微生物学检验
(一)脑膜炎奈瑟菌
1.鉴定程序
脑膜炎奈瑟菌鉴定程序见图15-1。
图15-1脑膜炎奈瑟菌鉴定程序
2.标本采集根据临床病程采集不同标本。菌血症期采取血液,出现出血点或淤斑时取淤斑渗出液,出现脑膜刺激症状时抽取脑脊液,上呼吸道感染及带菌者取鼻咽分泌物。该菌抵抗力极低,采集标本后应立即送检(注意保温)或床旁接种后立即孵育。
3.标本直接检查
(1)直接镜检:脑脊液标本直接涂片或离心取沉渣涂片、皮肤淤点(淤斑)渗出液涂片,革兰染色后镜检,若见到白细胞内外革兰阴性双球菌,可报告“检出革兰阴性双球菌,疑似脑膜炎奈瑟菌”,对流脑早期诊断有重要意义。
(2)抗原检查:试验原理为凝集试验,其检测结果应结合涂片及培养结果综合考虑,抗原检测阳性可作为推断性诊断的依据。
(3)分离培养:脑脊液标本接种于巧克力琼脂或羊血琼脂平板,咽拭子或鼻咽拭子接种于选择培养基,如改良Thayer-Martin(MTM),GC-Leet等培养基。血标本增菌培养后,移种至巧克力琼脂平板或血平板上。置于5%~l0% CO2环境35℃培养,24~43 h观察菌落,培养72 h无菌生长报阴性。
(4)鉴定:取可疑菌落涂片、革兰染色为革兰阴性双球菌,氧化酶试验阳性可初步确定为奈瑟菌属。需进一步做生化试验,若葡萄糖及麦芽糖发酵均阳性、其他糖类发酵试验均阴性,可确定为脑膜炎奈瑟菌。与淋病奈瑟菌及卡他莫拉菌的鉴别见表15-1。用分型血清可鉴定到型。
(二)淋病奈瑟菌
1.检验程序淋病奈瑟菌检验程序见图15-2。
图15-2淋病奈瑟菌检验程序
2.标本采集男性患者急性期用无菌棉拭子蘸取脓性分泌物,非急性期用无菌细小棉拭子伸入尿道2~4 cm,转动拭子后取出。女性患者先用无菌棉拭子擦去宫颈口分泌物,再用另一无菌棉拭子插入宫颈内1 cm处,转动采集分泌物标本。患结膜炎的新生儿,取结膜表面脓性分泌物。应注意的是本菌对外界环境抵抗力极低且易自溶,采集标本应立即送检(注意保温)。
3.标本直接检查 接到标本后应立即涂片、革兰染色镜检,男性尿道分泌物标本见中性粒细胞内、外较多革兰阴性双球菌,有助于淋病早期诊断。女性宫颈分泌物标本见中性粒细胞内、外大量革兰阴性双球菌,必须结合培养结果证实后方可报告,因为阴道内有正常菌群寄生。新生儿结膜分泌物标本见到中性粒细胞内、外大量革兰阴性球菌,可初步诊断为淋球菌性结膜炎。
4.分离培养 疑为淋病奈瑟菌感染的标本立即接种于选择培养基MTM等,置于5%CO2环境,35~37℃孵育24~48h,菌落直径0.5~1.0 mm,灰褐色、光滑、半透明,呈露滴状。培养72 h无菌生长报阴性。
5.鉴定检验程序见图15-3。取可疑菌落涂片、革兰染色镜检见革兰阴性双球菌,氧化酶阳性,触酶阳性,葡萄糖发酵试验阳性,其他糖类阴性,可确认为淋病奈瑟菌。与脑膜炎奈瑟菌及卡他莫拉菌的鉴别见表15-1。
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