一、E-试验

E-试验是一种结合了稀释法和扩散法的原理与特点，测定细菌对抗菌药物敏感度的定量技术。E-试验试纸条是5 mm×50 mm的商品化塑料条，一面是干化学成分、呈连续浓度梯度分布的抗菌药物，另一面刻有对应的药物浓度（ug/mL)。培养基、受试菌菌液的制备、接种、培养及质量控制同纸片扩散法。受试菌菌液涂布平板后，轮辐状放置E-试验试纸条，35℃培养16～20 h后，围绕试纸条可形成椭圆形的抑菌圈，抑菌圈与试纸条边缘相交处所对应的浓度刻度即为MIC值，如图10-4所示。CLSI对于稀释法的MIC折点解释也适用于E-试验法。E-试验不仅可用于一般细菌的MIC测定，也适用于一些生长缓慢的细菌、厌氧菌和真菌。该方法使用方便、操作简单，缺点是成本较高。

二、联合药敏试验

在以下情况临床上需联合一使用抗菌药物：①用于病原菌尚未确定的急、重症感染的经验治疗，以扩大治疗的覆盖面：②治疗多种细菌所引起的混合感染；③针对某些耐药菌可起到协同抗菌作用；④减少或推迟治疗过程中细菌耐药性的产生；⑤减少治疗指数低的抗菌药物的用量从而减轻其毒副作用。

联合药敏试验(synergy testing）是测定两种抗菌药物联合应用时的抗菌效果，可以出现4种结果：无关（indifference，活性等于两药中较高者）、协同（synergy,1+1>2),累加(addition,1+1=2）和拮抗（antagonism ,1+1<2)。联合药敏试验时能够有协同效应最为理想。协同效应常发生于：①两种药物在细菌的不同部位抑制细胞壁合成或阻断细菌的新陈代谢；②β-内酰胺类药物增加了氨基糖苷类药物进入细菌细胞的数量；③β-内酰胺类药物与β-内酰胺酶抑制剂联用。联合药敏试验常用两种方法：纸片法（定性）和棋盘稀释法（定量）。

（一）纸片法联合药敏试验

纸片法联合药敏试验所用的培养基、药敏纸片、菌液和培养条件等均和AST纸片法相同。将两种药敏纸片邻近贴在涂菌的琼脂平板上，使两纸片的中心距离恰好等于两药敏纸片单独试验时抑菌圈的半径之和，按规定条件孵育之后观察抑菌圈的形状改变，并据此判断两药联合药敏试验的结果，如图10-5)所示。

（二）棋盘稀释法联合药敏试验

棋盘稀释法是目前常用的定量联合药敏方法，其步骤是首先采用肉汤稀释法分别测定两药对受试菌的MIC，然后根据所得MIC确定含有药物肉汤的稀释浓度（一般为6～8个浓度，药物最高浓度为MIC的2倍，依次对倍稀释），将各个浓度的两种药物肉汤分别在方阵的纵列和横列等量混合，组成棋盘模式、不同浓度组合的两种药物肉汤混合液。混合液中加入受试菌液，使其终浓度为5×10⁵ CFU/mL, 35℃培养16～20 h后观察结果，以肉眼所见无细菌生长的最低药物浓度为两种药物联用时的MIC值。部分抑菌浓度（fractional inhibitory concentration, FIC)指数可据此计算：

FIC指数=联用时A药MIC／单测时A药MIC＋联用时B药MIC／单测时B药MIC。

图10-5纸片法联合药敏试验的结果

A．无关作用；B．协同作用；C.累加作用；D．拮抗作用

当FIC指数≤O.5时为协同作用，0.5<FIC指数≤1时为累加作用，1<FIC指数≤2时为无关作用，FIC指数＞2时为拮抗作用。