细胞转化（cell transformation）是指细胞在各种物理化学因子作用下发生的一系列表型改变，包括细胞密度依赖性、接触抑制和贴壁生长特性的丧失。转化的细胞引入动物体内通常可导致瘤变。细胞转化从本质上讲是遗传物质结构或表达异常所致。细胞转化试验常在原代培养的细胞如叙利亚地鼠胚胎细胞（SHE)、仓鼠胚胎细胞和小鼠前列腺细胞中进行，这些原代细胞易于制备，发生转化后容易识别，同时具有代谢活化能力。 SHE细胞是二倍体细胞，在遗传上稳定，寿命有限，能够代谢许多前致癌原成为终致癌原，而且自发转化率低。原代培养细胞转化克隆形成率比永久细胞株低。永久细胞株C3H、小鼠成纤维细胞C3H/1OT1/2 ,Swiss小鼠胚胎细胞3T3-Swiss albino、小鼠成纤维细胞BALB/c3T3也可用于细胞转化测试。目前常用的测试系统是SHE和BALB/c3T3。由于细胞转化测试的终端指标是细胞的恶变现象而非其机制，所以用该手段预测化学物质的致癌性比其他遗传毒理学手段更为贴切。

【材料】

1．怀孕叙利亚地鼠。

2. 95％乙醇。

3. DMEM,F12培养基、胎牛血清（FBS),PBS,

4．锥虫蓝溶液。

5．二甲亚砜(DMSO)。

6．结晶紫溶液。

7．倒置显微镜。

【方法】

1．收获地鼠胚胎，分离胚胎细胞，并建立原代细胞培养。

2．用10m1 PBS洗单层细胞2次，加入10ml胰蛋白酶溶液扩散单层细胞，暴露5分钟，在800r/min离心10分钟，收集细胞，去除上清液，用lOml新鲜的DMEM-10% FBS重新混悬细胞沉淀。调整细胞浓度为每个lOmm平板内含5×10⁶个细胞。

3．测定受试物的细胞毒性。

（1）在lOm1F12-10% FBS中，接种1x10⁶个CHO细胞，过夜贴壁。

(2）为确定适当的给药方案，试验品应用一个宽剂量分别暴露于细胞（低剂量与高剂量相差2个数量级左右）。如低剂量产生90％～100％的接种效率，高剂量产生50％的接种效率，用于细胞转化试验。

(3）受试物处理后，从培养板中移出，用PBS冲洗细胞2次。

(4）用胰蛋白酶处理单层细胞，计数细胞，用锥虫蓝排斥试验确定细胞存活率。

(5）在有10m1 DMEM-10%FBS的lOmm培养板上接种100～1000个细胞，每个剂量用6个板。

(6）在5% C0₂,37℃培养箱中培养2周。

(7）用PBS冲洗细胞，用95％乙醇固定5分钟，用结晶紫溶液染色5分钟。

(8）洗去多余染料，计数集落数量，计算接种效率：

接种效率=（克隆数量／接种细胞数）×100

4.测定细胞转化

(1)用胰蛋白酶处理的未暴露的SHE细胞，用等体积新鲜的DMEM-10% FBS和胰蛋白酶处理。

(2）在lOmm培养板上接种100～1000个细胞，每个剂量用6个板。

(3)在5% C0₂,37℃培养箱中培养2周，或培养到形成可见集落，在培养期间，每周换2次培养液。

(4）洗去培养液，用PBS洗2次细胞，用95％乙醇固定5分钟。

(5）用结晶紫溶液染色5分钟。

(6）洗掉多余染料。

【结果与分析】

计数每一个培养板活克隆的数目，检查其形态学转化。在倒置显微镜下，观察每一个集落的细胞交叉形集落、正常克隆、转化克隆，用记号笔在培养板底部圈出转化集落，计算形态转化频率（％）：转化集落／总数量x100。

【注意事项】

1．胎牛血清的质量对于确保细胞转化水平的最佳生长和一致性是至关重要的。不同癖好的胎牛血清可能对致癌原产生不同的转化水平。

2．可以应用第三代或第四代以外的细胞，但分裂几次后的细胞确保排除在混合胚胎细胞的原代培养中出现的许多非增殖细胞，这样可进一步改善形态转化的评价。如果在早期传代期间去除非增殖细胞和其他碎片，被染色的培养板容易被读取。当培养任何胚胎衍生的细胞类型时，被混合的细胞群总是存在问题。如果细胞在暴露于致癌原之前传代多次（如6～7次），则试验结果不理想，可能与细胞增殖的能力有限有关。此外，随着传代代数的增加，染色体和（或）遗传改变频繁增加，这些改变可能影响细胞转化试验，因此，应用第3代或第4代的细胞能够获得较好结果。