组织型纤溶酶原激活物（tissue-type plasminogen activator,t-PA）和尿激酶型纤溶酶原激活物（urokinase-type plasminogen activator, u-PA）通过活化纤溶酶原成为纤溶酶，在纤维蛋白溶解中起重要作用。大多数溶血栓药物即是通过影响t-PA的含量或活性而发挥作用的。循环血中的t-PA和u-PA主要来自内皮细胞。t-PA的分泌方式有两种，一种是基本途径，另一种是激活途径。后者又称t-PA的急性释放，它对调节局部t-PA浓度、加速血栓溶解具有重要意义。

通过测定血液中t-PA（或u-PA）含量可用以探讨溶血栓药物的作用机制。用ELISA法，以抗t-PA单克隆抗体包被96孔板，样品中的t-PA结合于96孔板孔中，加入生物素标记的抗t-PA多克隆抗体，再加入过氧化物酶标记的抗生物素蛋白，最后加入底物，显色后在酶标仪上测吸光度值，进而计算t-PA含量。同理，用抗u-PA单克隆抗体，即可测定u-PA含量。

【材料】

1．体外培养的血管内皮细胞；

2．抗凝剂枸橼酸钠；

3.酶标仪。

【方法】

1．制备内皮细胞培养液取静止状态或加入激动剂（如凝血酶）激活后不同时间的培养液10O ul测定。

2．制备枸橼酸钠抗凝血浆。

3.测定步骤96孔板用抗t-PA单克隆抗体包被，并用含0.05％吐温20的PBS洗3次，标本中加入0.Olmol/L的EDTA及0.25％酪蛋白（终浓度）。取100ul样本加入多孔板中，25℃孵育4小时。用上述PBS洗3次，加入100ul生物素标记的羊抗t-PA多克隆抗体，25℃孵育2小时，用含吐温的PBS洗3次，加入100ul 1：10 000过氧化物酶标记的抗生物素蛋白，25℃孵育1小时。洗4次，加入100ul四甲联苯胺底物缓冲液，25℃反应30分钟，加入50ul的2mo1/L硫酸终止反应，于酶标仪上450nm处测OD值。

4．制备标准曲线标准品t-PA浓度0～250pg/ml，同上加入0.0l mol/L的EDTA及0.25%酪蛋白，每浓度重复3复孔，取平均值。

【结果与分析】

此法测t-PA灵敏度高，可达l0pg/ml，而放免法的灵敏度仅为1 ng/ml。故迄今为止，仅此方法可用于测定体外培养内皮细胞t-PA的急性释放，此方法日内测定的相对偏差为3.4%，日间测定的相对偏差为7%。

此方法可用于测定血浆、内皮细胞培养液及内皮细胞提取物中的t-PA。

t-PA水平降低可见于动脉血栓形成、缺血性卒中、心肌梗死及DIC等；t-PA水平增高可见于静脉滞留、剧烈运动、应激反应及先天性t-PA含量增高症。用此方法可测定药物对内皮细胞t-PA含量的影响从而进行药物作用机制的探讨。

【注意事项】

1．抽血时应避免挤压，以免t-PA进入血液。

2．要严格控制各项试验条件。