常见的血液肿瘤主要包括各类白血病、多发性骨髓瘤以及恶性淋巴瘤。血液肿瘤培养最常用的标本是外周血或骨髓样本。取样后将外周血或骨髓样本收集于无菌肝素化试管中。血细胞可从外周血中用梯度离心的方法获得。以常见的白血病肿瘤细胞培养为例，介绍血液肿瘤细胞的培养方法。

【材料】

1.临床采集的白血病患者外周血或骨髓液。

2.RPMI 1640（含青霉素250U/ml、链霉素250 ug/ml、庆大霉素50ug/ml、两性霉素B25 ug/ml)、胎牛血清、PBS液、淋巴细胞分离液、抗凝剂（肝素等）。

3．离心管、细胞计数板、培养瓶。

【方法】

1．将肝素抗凝的外周血或骨髓液经适当稀释后，沿管壁小心加到装有淋巴细胞分离液的离心管中，使外周血稀释液在的表面，室温2000r/min，离心20～30分钟。

2．离心完毕后，无核的红细胞和多核的粒细胞在底层浓缩成团块。可见淋巴细胞分离液表面有一层单核细胞层，取单核细胞层至另一离心管中，用PBS 1500r/min，离心10分钟洗涤1次。

3．弃上清液后，沉淀的细胞即为白血病细胞，加入含10％胎牛血清的RPMI 1640完全培养液中，制成细胞悬液，细胞计数后接种于培养瓶中。

【结果】

细胞接种后4小时，部分细胞开始贴壁。这些贴壁细胞是作用于正常细胞或恶性肿瘤细胞的集落刺激因子的来源。最初两周期间，需从培养物中去除这类细胞，采取差速贴壁的方法。最初几周，细胞增殖活跃，如果培养基很快变成黄色，可每隔2天进行半量换液。如果恶性肿瘤细胞持续增殖超过两个月，就很可能产生一新的细胞系。

【注意事项】

加入淋巴细胞分离液离心后，吸取中间层细胞一定要小心仔细，避免吸取其他杂质细胞。