常见肿瘤细胞的传代，多指细胞系的传代，根据不同肿瘤细胞采取不同方法。贴壁生长的细胞用消化法传代；部分贴壁生长但贴附不牢固的细胞也可以用直接吹打法传代；悬浮生长的细胞可以采用离心沉淀后再分离传代。

1．贴壁生长细胞的传代培养（以Hela细胞的传代培养为例）

【材料】

（1）Hela细胞。

(2）培养用液及试剂：D-Hanks液、0.25%胰蛋白酶、含10％小牛血清的DMEM。

(3）器具：离心管、培养瓶、玻璃吸管、细胞计数板。

【方法】

(1)选生长良好的Hela细胞一瓶，轻轻摇动培养瓶数次，弃原培养液后，用D-Hanks液洗一次。

(2)以25m1培养瓶为例，加入0.25%胰蛋白酶1 ml，轻轻晃动培养瓶，使消化液覆盖过细胞表面。把培养瓶放置显微镜下观察，发现胞体回缩、细胞间隙增大后，立即加入含10%小牛血清的DMEM，终止消化。

(3)用玻璃吸管吸取瓶内液体，反复吹打瓶壁细胞，使贴壁细胞脱落，形成细胞悬液。

(4）将吹打后的细胞悬液移至离心管中，以800～1000r/min低速离心5分钟，去除上清液，加入原先2倍量的新鲜培养液后，用玻璃吸管轻轻混匀制成细胞悬液。按1：2分配接种2瓶，置37℃,5% C0₂培养箱中培养。

2．悬浮生长细胞的传代培养（如人类白血病细胞的传代培养）

悬浮生长细胞因不贴壁生长，故传代方法比较简单。可直接传代，即将悬浮细胞自然沉淀到培养瓶底后，将上清液吸掉1/2～2/3，然后加入到相当原瓶2倍量的新鲜培养液后，移出一半至另一个新培养瓶即可。

悬浮细胞还可采用离心的方法传代，即将细胞连同培养液一并转移至离心管中以800～1000r/min离心5分钟，去除上清液，加入原先2倍量的新鲜培养液后，用玻璃吸管轻轻吹打形成细胞悬液，然后移出一半量细胞悬液至另一个培养瓶中，置37℃,5% C0₂培养箱中培养。

3．部分贴壁生长细胞的传代培养（如胃癌细胞黏附团块的传代培养）

此类细胞一般呈较松散的状态黏附在培养瓶上，可用敲击法使黏附在瓶壁的细胞团块从瓶壁上脱落，或者用玻璃吸管吸取培养瓶中的培养液，直接吹打，使细胞脱落。然后采取同上述悬浮生长细胞的传代方法进行传代培养即可。

【传代肿瘤细胞培养的注意事项】

1．当癌细胞还没有生长到足以覆盖培养瓶底壁的大部分表面（约80％以上）以前，不要急于传代，否则影响传代效果。

2．癌细胞经常重叠生长，如果混有成纤维细胞，可用吸管吹打或用低浓度胰蛋白酶消化，分离出癌细胞并传代培养。

3．从原代开始到第10代左右期间，培养细胞的增殖不稳定。因此，在传代操作中必须很慎重，并且确定适合该细胞的培养方法。

4．在早期传代培养过程中，为保证细胞生长状态良好，细胞接种密度不宜过低。大约在105/ml的细胞密度为宜。

5．在胰酶消化过程中要随时观察细胞状态的变化，防止消化过度。

6．吹打细胞时动作不要用力过猛，尽量不要出现泡沫，否则会对细胞产生损伤。同时要保证培养瓶壁都被吹打到，减少细胞量的损失。

7．对于增殖能力极低的细胞，可同时培养饲养细胞，或者向培养液中加入促细胞生长因子，常用的有胰岛素、氢化可的松、雌激素以及表皮生长因子、转铁蛋白等生物活性因子。

8．在成纤维细胞同癌细胞长期共存情况下，成纤维细胞常常生长较快，并超过癌细胞的生长，导致癌细胞生长受阻以至逐渐消失。因此，消除成纤维细胞成为癌细胞培养中的重要条件。