某些物质受紫外线照射时可发出荧光，这种物质被称为荧光物质。细胞内的天然荧光物质包括脂褐素、核黄素等。还有些细胞成分虽然不是荧光物质，但可与某些荧光物质，如酸性品红、甲基绿、叮啶橙等结合，经紫外线照射后发出荧光。
荧光显微镜是利用一定波长的光激发标本产生不同颜色的荧光，再通过物镜和目镜的放大作用来显示标本中的某些化学成分和细胞组分的显微装置。具有灵敏度高、可进行活体观察等优点。

1. DNA与RNA吖啶橙荧光染色法吖啶橙（acridine orange AO）与细胞内的DNA,RNA都有亲和力，但结合后却发出不同颜色的荧光。DNA呈亮绿色，而RNA呈橘红色或火红色。此法简便快捷，既可染活细胞又可染固定细胞。

【材料】

吖啶橙染色液：1g吖啶橙溶于100ml生理盐水中，配成1％的母液，4℃冰箱保存备用。使用时。用0.1 mol/L PBS (pH 4.8）稀释成0.01％的工作液。

【方法】以盖片培养法为例：

(1)取长满贴壁细胞的盖玻片先用Hanks液洗3次。

(2）用95％乙醇溶液固定15～30分钟，取出后晾干或用滤纸吸干。

（3）用1%醋酸作用30秒，再用PBS冲洗1分钟。

(4）移入0.01%吖啶橙（AO）染液中染色1～5分钟，再用PBS清洗1分钟。

(5）移入0. 1 mol/L CaC1₂分色30秒～2分钟。用PBS冲洗3次，每次数秒。

(6）甘油（甘油:PBS =1:1)封片，立刻观察（用激发波长405 nm的滤光片）。

【结果】

细胞核内因含DNA呈亮绿色，细胞质及核仁因含RNA呈橘红色或火红色。

2．免疫荧光染色法用荧光素标记已知抗体或抗原，检查细胞或组织标本相应的抗原或抗体。在荧光显微镜下，抗原抗体特异性结合部位的荧光素受激发光照射而发出明亮的荧光。根据荧光物质存在的位置和数量，可确定抗原抗体在组织中数量与分布。用于标记的荧光素有异硫氰酸（FITC）和四乙基罗丹明（RB200 )，前者发射的荧光波长为490～619nm（黄绿色荧光），后者发射的荧光波长为540～660nm（橙红色荧光）。

【材料】

(1) 0.5％的伊文思蓝液：0.5g伊文思蓝溶于89ml PBS (pH 7.2～7.4）中，再加11 ml 1% NaN₃，过滤,4℃冰箱保存。

(2)未标记的I抗和荧光标记的II抗，荧光标记抗体用0.02％伊文思蓝液稀释。

【方法】

间接荧光染色法染色

（1) 95％乙醇固定单层细胞培养物10～30分钟，或用冷丙酮固定5～10分钟。

(2）用PBS洗3次，5分钟／次，边洗边振荡。

(3）滴加未标记的I抗，置37℃湿盒中温育30分钟。

(4）用PBS洗3次，5分钟／次，边洗边振荡。

(5）滴加荧光标记的II抗，置37℃湿盒中温育30分钟。

(6）用PBS洗3次，5分钟／次，边洗边振荡。

(7）甩掉材料上的水分，立即于荧光显微镜下观察。

【结果】

伊文思蓝液将细胞背景染成蓝色荧光，与细胞特异性荧光（如异硫氰酸荧光）形成鲜明的对比，并减少了非特异性荧光。