1．细菌总数

细菌总数是指1 ML水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24 h培养后，所生长的细菌菌落的总数。检测意义：菌落数和水体受有机物污染的程度呈正相关。作为一般性污染的指标，可评价被检样品的微生物污染程度和安全性。水样菌落总数越多，说明水被微生物污染程度越严重，病原微生物存在的可能性越大，但不能说明污染的来源。监测方法：平板法、"3M”纸片法等，以传统的平皿法应用最为广泛。由于没有单独的一种培养基或其一环境条件能满足水样中所有细菌的生理要求，所以由此法所得的菌落数实际上要低于被测水样中真正存在的活细菌的数目。

                                                      图3.49细菌总数平皿法的操作示意

试验所需器材与试剂包括：无菌蒸馏水、营养琼脂培养基、1 ML吸管、10 ML吸管平皿、营养琼脂。主要检验程序：检样→稀释液→选择2~3个适宜稀释度→接种1 mL→加入适量营养琼脂→混匀→倒置培养37 ℃→菌落数→报告。

                                              图3.50细菌总数稀释法的操作示意

2．大肠菌群

大肠菌群是根据检测技术来定义的。大肠菌群（多管发酵法）是指一群需氧或兼性厌氧的，37℃生长时能使乳糖发酵产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。大肠菌群（酶底物法）指一群需氧或兼性厌氧的，能在37℃生长，并且能产生能分解邻硝基苯β-D-吡喃半乳糖昔(ONPG）的β-半乳糖普酶，从而使培养液呈现颜色变化的方法的细菌群。大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌。无论是多管发酵法，还是酶底物法，其归根结底都是MPN法，是以最可能数（mostprobablenumber）简称MPN来表示试验结果的。实际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。其检测意义为：作为描述粪便污染的指标，大肠菌群数的高低，表明了被粪便污染的程度，间接地表明有肠道致病菌存在的可能，从而反映了对人体健康潜在危害性的大小。如果从理论上考虑，并且进行大量的重复检定，可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。不过只要每一稀释度试管重复数目增加，这种差异便会减少，对于细菌含量的估计值，大部分取决于那些既显示阳性又显示阴性的稀释度。因此在实验设计上，水样检验所要求重复的数目，要根据所要求数据的准确度而定。

开展大肠菌群监测时，要区分总大肠菌群、粪大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠杆菌、大肠埃希氏菌等的基本含义。

(1）总大肠菌群（Totalcoliform)：指一群需氧或兼性厌氧的，37℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

(2)粪大肠菌群（Fecalcoliform)：是指在44.5℃温度下能生长并发酵乳糖产酸产气的大肠菌群，又称耐热大肠菌群。

(3）大肠埃希氏菌（Escherich.Coli)：通常称为大肠杆菌，是Escherich在1885年发现的，大多数是不致病的，主要附生在人或动物的肠道里，为正常菌群；少数的大肠杆菌具有毒性，可引起疾病。

大肠菌群（多管发酵法）的主要监测方法包括：MPN法、酶底物法、滤膜法、"3M"纸片法等。试验所需器材与试剂包括：水样、90ML无菌水、9ML无菌水、5ml,乳糖蛋白膝，10ML吸管、1ML吸管、酒精灯、吸球、EC肉汤。主要检验程序：国家标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养和证实试验；国家商检局标准（美国FDA)：采用两步法，即推测试验、证实试验。根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100mL(g）大肠菌群的MPN值。

大肠菌群（酶底物法）是利用专利技术固定底物技术酶底物法®(DST®）同时检测总大肠菌群或粪大肠菌群和大肠埃希氏菌。其中两种指示剂ONPG(Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside）和MUG(4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide)是可以被大肠菌群的β-半乳糖营酶和大肠埃希氏菌的β-葡萄糖醛酸酶分解代谢。

目前酶底物法在全球广泛地被使用在检测水中大肠杆菌群以及大肠杆菌。在美国，90%以上的实验室使用酶底物检测技术。在我国环境监测系统，酶底物技术日益普及，全国各级使用此法的监测站达到百余家，遍布全国各地。2006年总大肠菌群酶底物法方法标准己经编制完成（见：GB5750-2006《生活饮用水标准检验方法》）。《水质粪大肠菌群酶底物法》也已经列为2011年国家环保部标准项目。

开展细菌总数和大肠菌群监测项目时，除注重掌握试验过程，更要进一步了解国内外方法、排放标准和环境质量标准的内容和要求，理解监测中的4个不同：

不同标准

目前国内颁布的涉及细菌总数总大肠菌群标准包括：适用于生活饮用水及其水源水的适用于饮用水、水源水、地表水和废水的《水和废水监测分析方法》（第四版2002年）。粪大肠菌群（耐热大肠菌群）国内颁布的标准包括：适用于生活饮用水及其水源水的《生活饮用水标准检验方法》(GB/T5750.12-2006)；适用于医疗废水《医疗机构水污染物排放标准》(GB18466-2005)；适用于地表水、地下水和废水的《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法》(HJ/T347-2007)；适用于饮用水、水源水、地表水和废水《水和废水监测分析方法》（第四版2002年）。不同的标准，在方法操作上也略有不同。同时，还要考虑排放标准和环境质量标准。