1范围

本标准规定了水产养殖环境(水体、底泥)中孔雀石绿的高效液相色谱测定方法的原理、试剂和材料、 仪器和设备、分析步骤、结果计算、精密度和定量限。

本标准适用于水产养殖环境(水体、底泥)中孔雀石绿的测定。

2规范性引用文件

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GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

GB 17378. 5海洋监测规范 第5部分:沉积物分析

3原理

孔雀石绿经硼氢化钾还原为其代谢产物隐色孔雀石绿后，水样经过滤，底泥试样经乙腈和二氯甲烷混合溶剂提取，所得样液加入甲酸酸化，经固相萃取柱富集、净化,反相色谱柱分离，荧光检测器检测,外标法定量。

4试剂和材料

4.1试剂

4.1.1水:符合GB/T 6682 一级水的要求。

4.1.2乙腈(C₂H₃N)：色谱纯。

4.1.3甲醇(CH₃OH)：色谱纯。

4.1.4二氯甲烷(CH₂Cl₂)：色谱纯。

4.1.5甲酸(CH₂O₂)：分析纯。

4.1.6冰乙酸(CH₃COOH)：分析纯。

4.1.7硼氢化钾(KBH₄)：分析纯。

4.1.8乙酸铵(CH₃COONH₄)：分析纯。

4.2溶液配制

4.2.1 3%甲酸溶液:移取3 mL甲酸，用水定容至100 mL。

4.2.2硼氢化钾溶液(0.03 mol/L)：称取0. 081g硼氢化钾，用水溶解,定容至50 mL,现用现配。

4.2.3硼氢化钾溶液(0. 2 mol/L):称取0. 54 g硼氢化钾，用水溶解,定容至50 mL,现用现配。

4.2.4乙酸铵溶液(5 mol/L):称取38.5 g无水乙酸铵，用水溶解,定容至100 mL。

4. 2. 5乙酸铵甲醇溶液(0. 25 mol/L)：移取5 mL乙酸铵溶液用甲醇定容至100 mL。

4.2.6乙酸铵缓冲溶液(0. 125 mol/L):称取9. 64 g无水乙酸铵溶解于1 L水中，用冰乙酸调pH至 4.5。

4.2.7 80%乙腈水:量取80 mL乙腈与20 mL水混合。

4.3标准品

孔雀石绿草酸盐标准品[Malachite green oxalate salt,2(C₂₃H₂₅N₂) • 2(C₂HO₄) • C₂H₂O₄,CAS 号：2437-29-8］：纯度 ≥98%。

4.4标准溶液配制

4. 1孔雀石绿标准储备溶液:准确称取标准品，用乙腈稀释配制成100 μg/mL的标准储备液,-18°C 避光保存,有效期3个月。

4. 2孔雀石绿标准中间溶液(1 μg/mL):吸取1. 00 mL孔雀石绿的标准储备溶液至100 mL容量瓶, 用乙腈稀释至刻度，-18°C避光保存。

4. 3孔雀石绿标准工作溶液:根据检测需要移取一定体积的标准中间溶液，加入0.4 mL 0. 03 mol/L 硼氢化钾溶液，用乙腈准确稀释至2. 00 mL,配置适当浓度的标准工作溶液。标准工作溶液需现配现用。

4.5材料

4.5.1酸性氧化铝:粒度为100目〜200目(75μm〜150 μm)。

4.5.2 MCX混合型阳离子交换柱：3 mL/60 mg。使用前，依次用3 mL乙腈、3 mL甲酸溶液预淋洗。

4.5.3微孔滤膜：0. 22 μm，通用型。

5仪器和设备

5.1高效液相色谱仪:配荧光检测器。

5.2电子天平:感量0. 000 1 g,感量0. 01 go

5.3涡旋振荡器。

5.4超声波清洗器:频率40 kHz。

5. 5 离心机：多3 000 r/min。

5.6固相萃取装置：12孔或24孔。

5.7 pH 计。

5.8可控温氮吹浓缩仪。

5.9 注射器：50 mL 或 100 mL。

 

文章来源：《水产品兽药残留限量及监测方法查询手册》

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