4.2高效液相色谱法

4.2.1原理

甲醛在酸性条件下与2,4-二硝基苯肼在60°C水浴衍生化生成2,4-二硝基苯腙，经二氯甲烷反复分离提取后，经无水硫酸钠脱水，水浴蒸干，甲醇溶解残渣。ODS-C18柱分离，紫外检测器338 nm检测，以保留 时间定性，根据峰面积定量,测定甲醛含量，甲醛溶液高效液相色谱图见附录B

4.2.2仪器

4.2.2.1高效液相色谱，附紫外检测器。

4.2.2.2高速离心机。

4.2,2.3 10 mmX150 mm具塞玻璃层析柱。

4.2.2.4恒温水浴锅。

4.2.2.5涡旋混合器。

4.2.2.6移液器：1mL；微量进样器：20 μL；5 mL具塞比色管。

4.2.2.7 0. 22 μm 滤膜。

4.2.3试剂

4.2.3.1甲醇:色谱纯，经过滤、脱气后使用。

4.2.3.2二氯甲烷。

4.2.3.3  2,4--硝基苯腓溶液：称取100 mg 2,4--硝基苯腓溶解于24 mL浓盐酸中，加水定容至 100 mLo

4.2.3.4甲醛标准储备溶液:配制及标定见本标准4. 1. 3. 8条,临用时稀释至20 μg/mL。

4.2.3.5无水硫酸钠:经550°C高温灼烧,干燥器中储存冷却后使用。

4.2.4测定步骤

4.2.4.1样品处理

取4.1.4制备水蒸气蒸馏液0. 1 mL〜1. 0 mL,置于5 mL具塞比色管中，补充蒸馏水至1. 0 mL,加入 0. 2 mL 2,4-二硝基苯腓溶液，置60°C水浴15 min,然后在流水中快速冷却，加入2 mL二氯甲烷,涡旋混合器振荡萃取1 min,3 000 r/min,离心2 min,取上清液再用1 mL二氯甲烷萃取2次，合并3次萃取的下 层黄色溶液，将萃取液经无水硫酸钠柱脱水,60°C水浴蒸干，放冷，取1.0 mL色谱纯甲醇溶解残渣，经孔 径0. 22 μm滤膜过滤后做液相色谱分析用。

4.2.4.2色谱条件

4.2.4.2.1 色谱柱:ODS-C18柱,5μm,4. 6 nm × 250 nm。

4.2.4.2.2色谱柱温度：40°C。

4.2.4.2.3 流动相：甲醇+水(60+40) ,0. 5 mL/min。

4.2.4.2.4 检测器波长:338 nm。

4.2.4.3标准曲线的绘制

分别取20μg/mL的甲醛应用液0 mL、0.1 mL、0.25 mL、0.5 mL、0.75 mL、L 0 mL(相当于0μg、 2μg、5μg、10 μg、15 μg、20μg)于5 mL具塞比色管中，加蒸馏水至1. 0 mL,按4. 2. 4. 1处理后取20μL进样。根据岀现时间定性(5.1 min),峰面积定量，每个浓度做2次，取平均值，用峰面积与甲醛含量作图，绘制标准曲线。取样品处理液20 μL注入液相色谱测得积分面积后从标准曲线查出相应的浓度。

4.2.5结果计算

样品中甲醛的含量按式(3)计算,计算结果保留2位小数。

式中：

X₃——水产品中甲醛含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；

C₃ —曲线结果，单位为微克每毫升(μg /mL)；

M₃——样品质量，单位为克(g);

V₃——样品测定取蒸馏液的体积，单位为毫升(mL)；

200——蒸馏液总体积，单位为毫升(mL)。

4. 2. 6回收率

样品蒸馏液中添加甲醛标准溶液计算得到的回收率＞90 %。

4.2.7精密度

在重复性条件下获得2次独立测定结果：

当样品中甲醛含量≤5 mg/kg时，相对偏差≤1O % ； 当样品中甲醛含量＞5 mg/kg时，相对偏差≤5 %。

4.2.8检出限

样品中甲醛的检出限为0. 20 mg/kg。

 

文章来源：《水产品兽药残留限量及监测方法查询手册》

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