7 操作方法

7.1 试样制备

按照SC/T 3016的要求制备试样。

7.2 提取

称取试样(5±0.02)g于50mL离心管中，加入10mL三氯乙酸溶液，10000r/min均质1min，振荡5min，4500r/min离心15min，上清液转移至烧杯中，残渣用10mL三氯乙酸溶液同上述方法再提取一次，所得上清液合并过滤，收集到25mL容量瓶中，加入2mL庚烷磺酸钠溶液(4.12)，用水定容至25mL，摇匀。

7.3 固相萃取净化

依次用5mL甲醇和10mL水预洗C18固相萃取柱。将7.2步骤的提取液以约1.5mL/min流速通过固相萃取柱。依次用10mL水和4mL叔丁基甲醍-正己烷溶液洗柱，弃去洗出液。用5mL甲醇以约1.5mL/min流速进行洗脱，收集洗脱液于鸡心瓶中，加入2mL水，45°C减压浓缩至液体剩余1mL〜2mL，转移至5mL容量瓶，用2mL庚烷磺酸钠溶液(4.17)洗瓶，合并于容量瓶，用庚烷磺酸钠溶液(4.17)定容至5mL，经0.45微孔滤膜过滤，待上机分析。

注：固相萃取柱的预处理和净化过程保持柱子湿润。

7.4 标准工作曲线的制作

准确取标准储备液(4.18)，用庚烷磺酸钠溶液(4.17)稀释成浓度为0.1μg/mL、0.5μg /mL、1.0μg /mL、2.5μg /mL、5.0μg /mL系列标准工作液，供高效液相色谱仪分析。

7.5 色谱分析

分别注入50μL标准工作液和试样提取液于高效液相色谱仪中，按上述色谱条件进行色谱分析，记录峰面积，响应值均应在仪器检测的线性范围之内。在第6章规定的条件下，链霉素保留时间约为6.4min。根据标准品的保留时间定性，外标法定量。色谱图参见附录A。

7.6 空白试验

除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。

8 计算

试样中链霉素的含量按式(1)计算。计算结果需扣除空白值，结果保留3位有效数字。

式中：

X——试样中链霉素含量，单位为微克每千克（μg/kg)；

Cs——标准溶液中链霉素含量，单位为微克每毫升( μg/mL)；

A——试样液中链霉素的峰面积；

V——试样提取液最终定容体积，单位为毫升(mL)；

As——标准溶液中链霉素的峰面积；

m——试样质量，单位为克(g)。

9 方法灵敏度、准确度和精密度

9.1 灵敏度

本方法最低定量限100 μg/kg，最低检出限20 μg/kg。

9.2 准确度

本方法加标浓度为100 μg/kg〜5000 μg/kg时，回收率为70%〜120%。

9.3 精密度

本方法批内和批间相对标准偏差≤15%。

文章来源：《水产品兽药残留限量及监测方法查询手册》

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