［实验器材]

1．仪器

倒置显微镜，CO2培养箱，普通冰箱，超净工作台，低速冷冻离心机，显微数码摄影系统，IVC独立送风笼具。

2．材料与试剂

(1）非无菌材料酒精棉球，离心管架，血细胞计数板，记号笔。

(2）无菌材料和试剂辅料镊，眼科镊，眼科手术剪，一次性培养皿，一次性lml注射器，6孔细胞培养板，15ml离心管，长丝滴管，l0ml刻度移液管，10%BS-RPMI1640培养液，无菌生理盐水，lmol/LHCl溶液。

(3)实验动物与细胞材料健康小鼠，SP2/0或S180。

[操作步骤]

1．细胞悬液准备

脊椎脱臼法处死小鼠，无菌选取生长良好（有光泽，淡红色）的瘤组织。在PBS中将瘤组织剪碎后用匀浆器研磨，经80-100目筛网过滤成单细胞悬液。
或收集对数生长期的培养瘤细胞。

收集细胞建议用PBS离心清洗1-2次。

计数并调整细胞浓度至107-108/ml,悬浮细胞使用无血清基础培养液或生理盐水，分装至1ml注射器，待用。

2．接种

常规消毒后，于接种部位（通常为背部皮下，或腋窝腹股沟皮下）用医用注射器皮下潜行一段后注入细胞悬液（0.1m1/部位，＞106细胞）。

3．实体瘤生长观察

次日注意观察动物的健康情况。

4．实体瘤细胞收集

实体瘤生长时间一般需要8-15d。生长时间太短，获得的细胞数偏少。生长时间过长，实体瘤外部皮肤容易破损，影响肿瘤细胞质量。正常饲养或饲养时适当加强营养。

脊椎脱臼法处死小鼠。用消毒酒精浸泡小鼠5-10s，沥干，放置于超净工作台内无菌培养皿内，或放置于酒精棉球消毒的锡箔纸上。

无菌操作，剪开瘤体外皮肤，剥离实体瘤外组织，取出用含5-10倍抗生素的无菌PBS淋洗1-2次。用无菌眼科镊和眼科手术剪分离组织块，使成1mm3大小。处理后的组织块经胰蛋白酶消化，制备成单细胞悬液。及时计数以备使用。