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细胞培养实验的水电配置

发布时间:2015-11-20 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:1464

一、细胞培养的电源配皿

细胞培养工作的正常运行,除了设计上符合粉尘控制,有专门的仪器设备以外,特别地依赖于持续、稳定的市电(220V和380V)供应。

电压过高会烧坏仪器设备的电路系统,过低则影响正常使用。

突然断电和恢复供电,容易产生超负荷电流,也会烧坏仪器设备。对于连续运行的仪器或设备,如CO2培养箱、超低温冰箱、普通冰箱等,特别需要注意避免,否则影响实验或生产的连续进行。

有时需要为特殊的易损设备或仪器配备稳压电源或UPS(不间断电源)。UPS是针对各种精密仪器、工业生产设备以及电脑等相关电器提供在突然断电的情况下,能够持续一定时间的稳定供电,从而能在相关电器真正断电以前保存重要数据以及正常关闭而防止非正常关闭(突然断电)所造成的各类器械的硬件损伤。稳压电源是由单相稳压器(输出220V)或三相稳压器(输出380V)提供的。带稳压作用的UPS,一般可允许输入端电压在160-260V范围波动,能保证持续供电的情况下保持稳定的电压输出。

二、细胞培养的用水配置

持续、稳定的城市自来水供应对于细胞培养工作的正常运行也是非常必要的,并且,细胞培养用水的制备也是非常重要的。

由于动物组织细胞培养和人的组织细胞培养都属于体外培养,是利用合成培养基血清成分在满足稳定的设定温度、相对饱和的湿度、稳定的设定CO2浓度、相对无菌等严格条件的培养箱中进行的培养,细胞或组织直接暴露在培养液环境中,还受到培养液中可能存在的重金属离子等不利因素的威胁(可导致培养细胞坏死或凋亡)。

配制培养液用水、细胞操作器皿的清洗用水、培养细胞药物试验中供试药物配制用水,都需要高纯水以上(电阻率5MΩ·cm以上),如三蒸水、亚沸水、高纯水和超纯水等。其他情形的用水要求可能是自来水、蒸馏水(或反渗透水、去离子水等纯水)。

一般地面的除尘,使用自来水湿透拖把拖地,地面消毒需要蒸馏水(或反渗透水、去离子水等纯水)配制的消毒剂浸湿拖把拖抹地面。

清洗器皿时用自来水配制去污剂等清洗液,使用自来水冲洗,然后用蒸馏水(或反渗透水、去离子水等纯水)冲洗,最后用高纯水冲洗。

水套式CO2培养箱的夹套用水和高压蒸汽灭菌器用水通常需要蒸馏水(或反渗透水、去离子水等纯水)。

以下将有关实验用水的区分和制备要求等分别作些介绍。

三、实验用水的类型

实验用水即纯水的区分是依据水的电导率或电阻率区分(表6-1)。水的纯度越高,电阻率越大,电导率越小。水的电阻率是指某一温度下,边长为lcm正方体的水的相对两侧间的电阻,单位为Ω·cm(欧姆厘米)、MΩ·cm(兆欧姆厘米)。电导率为电阻率的倒数,单位为S·cm-1(西门子每厘米)、μS·cm-1(微西门子每厘米)。

水的电阻率(或电导率)反映了水中离子含量的多少,是水纯度的一个重要指标,水的纯度越高,离子含量越低,水的电阻率越大(电导率越小)。

纯水的电阻率用MΩ·cm单位表示,纯水的电导率用μS·cm-1单位表示。一般用电导率仪间接测定电阻率,换算关系为1μS·cm-1=l0-6·cm-1=106Ω·cm=1MΩ·cm。

在线测量电阻率或电导率时,将电导电极或测量装置与被测水系统管道相连接。通水将管道测量装置与电导池(又称测量电极)中的气泡驱尽,调节水流速(一般不低于0.3m·s-1),通常电阻率仪或电导率仪都会带有温度测量的功能,可以直接显示补偿到25℃的电阻率、电导率值。

电阻率在1MΩ·cm以下的纯水,也可以用离线式电导率仪检测,与在线检测误差基本一致。当检测电阻率大于1MΩ·cm的高纯水或超纯水时,则通常采用在线检测的方法,因为离线检测时受环境干扰比较大,会产生相当大的误差。

细胞实验室常用小型制水设备仪器主要有蒸馏水器、亚沸水机、高纯水机、超纯水机。

四、实验用水标准及细胞培养用水规范

(一)纯水标准

在实验用水和工业用水中,存在不同的标准,细胞培养使用何种纯度的水在本书将作适当的描述。

用水标准有许多,如中国实验室用水国家标准GB/T6682、电子级用水标准GB/T11446.1、CAP(美国临床病理学会)用水标准、ASTM(美国材料试验学会)用水标准、NCCLS(国家临床检验学会)用水标准等。

我国国标规定:一级水用于严格要求的分析实验,包括对悬浮颗粒有要求的试验,如高压液相色谱分析用水;二级水用于无机痕量分析试验,如原子吸收光谱分析;三级水用子一般化学分析实验。

(二)细胞培养实验室用水

在一般生物学实验工作中,水是必不可少的,且不同的分析方法、分析对象、分析质量对纯水的要求也不相同。三级水适用于微生物检验中培养基的制备,实验室器皿的最后清洗,缓冲液、化学试剂的配制,高压消毒锅用水,CO2培养箱夹套保温用水等。另外,随着现代生物化学和物理学的发展,相应地提高了实验室用水的要求,如PCR仪,动植物细胞的培养,仪器分析试剂的配制及稀释,生理、病理、毒理学实验用水等都需要高纯水或超纯水。

1.培养器皿洗涤过程中的用水顺序

(1)自来水初次清洗器皿残留物,或洗涤剂刷洗后用自来水清洗去除清洗剂。以去除清洗剂为目的时,通常需要清洗10-20次。根据需要,应在荡洗、冲洗、淋洗或灌洗等清洗方式中合理选择,以便达到节省用水而有效地清洗目的。

(2)蒸馏水,或反渗透水,或去离子水清洗自来水中的金属离子和有机杂质。需要清洗3-5次。相似的道理,应在荡洗、冲洗、淋洗或灌洗等清洗方式中合理选择。

(3)高纯水清洗蒸馏水、反渗透水或去离子水中可能存在的金属离子杂质。需要1-3次。相似的道理,应在荡洗、冲洗、淋洗或灌洗等清洗方式中合理选择。

2.高压蒸汽灭菌锅灌装用水、CO2培养箱夹套用水

可以是蒸馏水、反渗透水或去离子水等普通纯化水,不得使用自来水,否则容易对仪器产生锈蚀,影响仪器使用寿命。

3.动物细胞培养用液的配制用水

必须选用新鲜制备的亚沸水、新鲜制备的三蒸水、高纯水或超纯水。其中,理想用水是超纯水。

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