一、目标培养细胞的与染色体计数

细胞染色体计数是测定细胞染色体数的方法，与正常细胞比较时，能够判断该细胞是否发生染色体变异。

体外培养细胞的染色体计数方法如下：

1．染色体标本制作

(1)添加终浓度为0.04-0.80μg/ml的秋水仙素到对数生长期的哺乳动物细胞培养物中，继续培养2-4h。

(2）收集细胞悬液，使成单细胞悬液。1000r/min离心6min，弃上清。

其中，关于细胞的收集有两种情形：

①对于悬浮细胞的收集，使用80%-90％汇合生长的对数期细胞培养物。可以直接使用长丝滴管吸取培养液轻轻吹打培养器皿的内表面使成单细胞悬液，然后收集于离心管中。

②对于贴壁细胞的收集，使用80%-90％汇合生长的对数期细胞培养物，此时有足够多的分裂中期细胞。由于分裂中期细胞变圆与基底戮附不牢固，也可以直接使用长丝滴管吸取培养液轻轻吹打培养器皿的内表面使成单细胞悬液，才能收集到离心管中。最好不要使用胰蛋白酶消化法处理成单细胞悬液，以免非分裂细胞脱落影响观察。

(3)添加预先温浴至37℃的5ml低渗溶液（(0.075mol/LKCl)，用长丝滴管轻轻吹均匀，静置于37℃恒温水浴10-20min，以便胀大细胞和染色体。800r/min离心6min，弃上清。

(4）添加5m1临时配置的固定液（甲醇：冰醋酸=3:1)，轻轻混匀。静置15min后800r/min离心6min，弃上清。此步骤重复1-2次。

(5)添加少量临时配置的固定液，使细胞团块刚好溶解成细胞悬液即可。

(6)当取出的预先冷冻的载玻片出现细微水汽时，从40-50cm高处，用微量移液器滴加100-150μl细胞悬液于载玻片上，自然风干法干燥，或在酒精灯外焰50℃以下的区域往复移动载玻片进行快速干燥。

载玻片需要冷冻4h以上，现拿现用。如果冰冻时间不足，细胞贴附将受影响，并且细胞和染色体的分散性不好。

(7）滴加新鲜Giemsa染色液覆盖样品区，染色5-10min。流水淋洗载玻片样品区，用电吹风热风干燥。

2．染色体计数

上述染色体制片要求细胞分散均匀，染色体形态完整，中期分裂相的染色体数目齐全，互不重叠，能够进行准确计数和数码照相。

在显微镜下查找、观察目标细胞染色体，选择来自独立细胞的染色体组进行计数。

统计的细胞数应大于30个，其中85％以上的细胞具有恒定一致的染色体数，才能代表该培养细胞的真实染色体数。

二、培养细胞的染色体核型分析

核型是指一个细胞内的染色体按照一定的顺序排列起来所构成的图像。通常是将显微摄影得到的照片剪贴起来组成。正常细胞的核型能代表个体的核型。组型则是以模式图的方式表示，是通过对许多细胞染色体的测量取其平均值绘制而成，用以代表某个物种染色体组型的特征。

组型分析对于探讨人类遗传病的机制、动植物起源、物种间的亲缘关系、远缘杂种鉴定等方面都具有重要的意义。

染色体的基本形态学特征描述中，重要的参数有以下4个：

1．相对长度

相对长度指单个染色体长度与单倍体染色体总长之比，以百分率或千分率表示。如人类细胞单倍染色体长度=单倍常染色体总长＋X染色体（或Y染色体）长度。

2．臂指数

臂指数指染色体长臂与短臂的长度比值。臂指数1.0-1.7之间的称中部着丝粒染色体，1.7-3.0之间的称亚中部着丝粒染色体，3.0-7.0之间的称亚端部着丝粒染色体，7.0以上的称端部着丝粒染色体。

3．着丝粒指数

着丝粒指数指短臂长度占染色体长度的百分数。着丝粒指数在50.0-37.5之间的称中部着丝粒染色体，37.5-25.0之间的称亚中部着丝粒染色体，25.0-12.5之间的称亚端部着丝粒染色体，12.5-0之间的称端部着丝粒染色体。

4．染色体臂数

染色体臂数是根据着丝粒的位置决定的。着丝粒位于染色体端部的称为端部着丝粒染色体，其臂数可看作1。当着丝粒位于染色体中部或亚中部的，其臂数可计为2。