一、实训目标

1．掌握中药制剂丹参片的鉴别；

2．掌握含量测定方法及操作技能；

3．掌握检验结果的处理与判断。

二、实训原理

丹参片（市场购买或送检样品）

取丹参100帷，加90％乙醇回流1.5h,滤过，滤液回收乙醇至稠膏；药渣加水煎煮1h,滤过，滤液与上述稠膏合并，减压浓缩至适量，加辅料适量，混匀，干燥，制成颗粒，压制成1000片，包糖衣或薄膜衣，即得。

该样品为糖衣片或薄膜衣片，除去包衣后显棕色至棕褐色；味微苦、涩。

本实训采用直接比较法测定器有效成分的含量。

三、实训仪器与试剂

1．仪器

液相色谱仪；电子或分析天平（感量0.lmg)；超声仪；容量瓶；吸量管。

2．试剂

甲醇；乙腈；甲酸（色谱纯）；丹参对照药材；丹酚酸B对照品。

四、实训步骤

1．仪器准备

在使用具体仪器前，应详细阅读本仪器操作说明书。开机，初始平衡时间一般约需30min。

2．试液的制备

(1)对照品溶液的制备取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加水制成每1mL含1μg的溶液，即得。制备2份。

(2）供试品溶液的制备取本品10片，糖衣片除去包衣，精密称定，研细，取约0.2g，精密称定，置于50mL容量瓶中，加水适量，超声处理（功率250W，频率33kHz)20min，放冷，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1mL，置25mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。供试品溶液在注入色谱仪前，一般应经适宜的0.45μm滤膜滤过。

(3）流动相的制备量取30份甲醇、10份乙腈、1份甲酸及59份水，充分混合均匀，即得。制备好的流动相应通过0.45μm滤膜滤过，用前脱气。

3．色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-甲酸-水（(30:10:1:59）为流动相；检测波长为286nm。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000。
在选定的色谱条件下去对照品溶液l0μL注入色谱仪，记录色谱图，计算理论塔板数（按丹酚酸B峰计算），应符合规定。

4．试样的测定

分别取供试溶液和对照溶液10μL注人液相色谱仪，记录色谱图。供试溶液和对照品溶液每份至少注样2次，由全部注样结果（(n≥4)求得平均值，相对标准偏差（RSD）一般应不大于1.5％。计算供试品的百分含量，再根据供试品平均片重，计算每片含丹酚酸B(C36H30H16）的含量，应符合规定。

本品每片含丹参以丹酚酸B(C36H30O16）计，不得少于llmg。

5．结束工作

分析完毕后，先关检测器和数据处理机。用水，然后用甲醇一水冲洗，各种冲洗剂一般冲洗15-30min，特殊情况应延长冲洗时间。冲洗完毕，逐步降低流速至。，关泵，关电源，做好使用登记。

6．检验记录与报告

按规定要求进行数据处理并书写检验报告书。

五、注意事项

(1)实训前检查上次使用记录和仪器状态检查色谱柱是否适用于本次实训，色谱柱进出口位置是否与流动相的流向一致，原保存溶剂与现用流动相能否互溶，流动相的pH与该色谱柱是否相适用，仪器是否完好，仪器的各开关位置是否处于关断的位置。

(2)高效液相色谱法中，供试溶液在注入色谱柱前，一般应经适宜的0.45μm的滤膜滤过，或用固体萃取小柱对样品溶液进行预处理。

(3）高效液相色谱流路系统，从泵、进样器、色谱柱、到检测器流通池，在分析完毕后，均应充分冲洗，特别是用过盐流动相的，更应注意先用水，再用甲醇一水，充分冲洗。