一、实训目标

1．学习在紫外光谱区同时测定双组分体系—维生素C和维生素E;

2．熟练掌握紫外分光光度计的使用。

二、实训原理

维生素C（又称抗坏血酸）和维生素E（又称a-生育酚）在食品中能起抗氧化剂作用，即它们在一定时间内能防止油脂变酪。两者结合在一起比单独使用的效果更佳，因为它们在抗氧化能力方面是“协同的”。

抗坏血酸是水溶性的，a-生育酚是醋溶性的，但它们都能溶于无水乙醇，因此能在同一溶液中按照测定双组分的原理来测定它们。

三、实训仪器与试剂

1．仪器

紫外-可见分光光度计；石英吸收池；容量瓶；吸量管。

2．试剂

7.50×10-5mol/L维生素C；无水乙醇；1.50×10-4mol/L维生素E。

四、实训步骤

1．准备工作

(1）清洗容量瓶等需要使用的玻璃仪器，晾干待用。

(2)检查仪器，开机预热20min，并调试至正常工作状态。

2．配制系列标准溶液

(1)配制维生素C系列标准溶液分别吸取维生素C溶液4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00mL于4只（编号1.4号）50mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。

(2)配制维生素E系列标准溶液分别吸取维生素E溶液4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00mL于4只（编号1-4号）50mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。

3．绘制吸收光谱曲线

分别取上述标准系列中的2号溶液，以无水乙醇为参比，在220--320nm范围绘制维生素C和维生素E的吸收光谱曲线，并确定入射光波长λ1和λ2。

4．绘制工作曲线

以无水乙醇为参比，在波长λ1和λ2，分别测定维生素C和维生素E系列标准溶液的吸光度，并记录测定结果和实验条件。

5．试样的测定

取未知液5.00mL于50mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。在波长λ1和λ2处分别测其吸光度AC+Eλ1，AC+Eλ2。

6．数据处理

(1)绘制维生素C和维生素E的吸收光谱曲线，确定λ1和λ2。

(2)分别绘制维生素C和维生素E在λ1和λ2时的4条标准曲线，求出4条直线的斜率，即εCλ1、εCλ2、εEλ1和εEλ2。

(3）计算未知液中维生素C和维生素E的浓度。

五、注意事项

(1)试液取样量应经实验来调整，以其吸光度在适宜的范围内为宜。

(2)维生素C会缓慢地氧化成脱氢抗坏血酸，所以必须每次实验时配制新鲜溶液。

(3)抗坏血酸是水溶性的，a-生育酚是酯溶性的，但它们都溶于无水乙醇。本实验利用此性质来配制两种物质的标准溶液。

(4)本实验使用的容量瓶和移液管为洁净、干燥的容器，不能含有水。