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(1) 是否任何一个抗体都可以用于ChIP实验?
不同的抗体和抗原结合能力不同,有的抗体可以结合抗原但未必能用在ChIP反应。现在生产抗体的公司对产品的用途都进行标注,随着ChIP的广泛应用,有的厂家对抗体能否用于ChIP也进行了标注,因此在购买及使用前一定仔细阅读抗体的说明书,若厂家没有标注,则需要查找文献或通过预实验来确定抗体的使用。
(2) 剪切过程为何一定要低温及加蛋白酶抑制剂?
ChIP是基于免疫学原理的免疫共沉淀,因此对于可能造成影响抗原决定簇,进而影响与抗体结合的因素应加以控制。为防止蛋白的水解、修饰,溶解抗原的缓冲液必须加蛋白酶抑制剂;利用超声对DNA进行剪切会产生热量,为防止蛋白质热变性,需要在冰上操作。
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