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1) 样品杯渗漏:可能原因为处理和放置样品杯不正确。样品杯很脆,它不能多次的从加样架上拿下来又安装上去。需检查样品杯是否与IPG胶条对准。检查样品杯底部是否与IPG胶条的表面平行并接触。样品杯渗漏往往在加样前能被检查出来。当将IPG覆盖液倒入到Immobiline相干胶条托盘上时,观察IPG覆盖液是否从样品杯底部渗漏。若此情况发生,需重新安装样品杯,用微量移液器移走渗入的液体,并且继续检查样品杯是否渗漏。另一种检查是否渗漏的方法是,将0.01%的溴酚蓝溶液放入样品杯内,观察是否有染料从样品杯渗出。若有染料渗出,则样品杯必须重新安装来消除渗漏,但在加样前染料必须从样品杯内除去。
2)电流过低:①对IPG凝胶来说很常见,凝胶的电导很低。通常IPG等电聚焦开始时电流接近1mA,随后下降到μA级范围内,这依赖于在电泳仪上IPG胶条的数量;②电源不能检测到μA级低电流并且关闭。检查低电流选项是否打开(参照电源手册),IPG等电聚焦开始时,电流的范围不能被电源检测出来;③在再水化液中没加IPG缓冲液。
3)在开始电泳时没有电流:①电极接触不当或缺少电源连接。应确保所有的Multiphor II位于正确位置,确保电极的金属片与固定干胶条托盘的侧面的金属片接触。注意带有电极的金属板只位于标有红或黑圈的一端。确认在冷却板下的连接电缆是否正确安装;2}IPG胶条没有完全水化;③电泳仪的高电压接头没有正确地插人到电源上。
4)样品染料液没有从样品杯中移出:样品染料从样品杯中移出往往需要好几个小时,如时间过长,可能的原因有①样品杯按下时用力太大,以至于样品杯穿过胶条与塑料支持胶片靠在一起。这能使电流受阻,并且机械地阻碍蛋白质进人胶条。此时应撤换IPG胶条,并且重新安装样品杯;②样品中的离子强度大于胶条内的离子强度。由于这种原因,样品区域的场强不足以使蛋白质按估计的速度从样品区域移走,甚至有时会使移动完全停止。应尽可能的稀释样品或在加样前利用渗析法除去盐离子。
5) IPG胶条产生火花或燃烧:①电流设置过高,不要使每根胶条的电流高于50mA; 0IPG干胶条再水化不充分,确保用足够的再水化液对IPG胶条进行再水化。去除在将胶条放入再水化液后胶条下面产生的较大气泡,并检查整个胶条表面润湿状态;③在等电聚焦过程中,如果IPG胶条变干燥,应加入IPG覆盖液,来防止水化后的IPG胶条失水。
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