将蛋白质从丙烯酰胺凝胶转移到印迹膜[如聚偏氟乙烯(PVDF),硝酸纤维素或尼龙膜]之后，进行染色，PVDF是首选和比较通用的膜，在此重点介绍；然而，在硝酸纤维素膜上，大多数染料的效果相似，也可用作转印膜使用。

在整个实验过程中均需用高纯水（Milli-Q纯化的或相当质量的水），所有塑料和玻璃盒在用前必须彻底清洗干净，以避免人为的染色假象。在操作膜时，应当只用镊子夹住其边缘，除另有说明外，所有步骤都在室温下进行，并缓慢搅动。对于时间超过1 min的步骤，建议使用定轨摇床。如果在转印后要将PVDF膜干燥，则将其在100％甲醇中湿润5秒钟并用水冲洗，之后再染色。染色液、脱色液和洗涤液的量应足以覆盖膜，让膜在液体中自由漂浮。所有溶液均可在室温贮存数月，除非另有说明。

蛋白质（大于50纳克／条带）在淡蓝色的背景上呈现深蓝色的条带，对于蛋白质测序和蛋白质的原位切割，氨基黑是首选的染料。

材料：

PVDF、硝酸纤维素或尼龙膜

氨基黑10B染色液：0.1%（W/V )氨基黑（萘酚蓝黑10B，Sigma公司），溶于10% (V/V）的乙酸中

5％(V/V）乙酸

塑料盒

1) 将印迹转移膜放在塑料盒中，用水洗涤3次，每次5 min。

2）用氨基黑10B染液染色1 min。

3) 用5％乙酸脱色两次，每次1 min。

4）用水冲洗两次，每次10 min，然后空气干燥。