应用本方法可检测到用其他银染色法无法检测到的一些蛋白质。

材料：

含有目的蛋白的聚丙烯酞胺凝胶

固定液A; 50% (V/V）甲醇/10% (V/V）乙酸（室温可保存1个月）

固定液B; 5% (V/V）甲醇/7% ( V/V）乙酸（室温可保存1个月）

10% (W/V）戊二醛

5 μg/ ml二硫苏糖醇（DTT，每天新鲜配制）

0.1% (W/V）硝酸银

碳酸盐显影液

2.3 mol/L柠檬酸

0.03%（W/V)碳酸钠（可选）

带盖的玻璃或塑料容器，大小适合于盛放凝胶

台式摇床

1) 从电泳槽中取下凝胶，放在带盖的塑料或玻璃容器中。在台式摇床上摇动，按以下顺序固定凝胶：

在5-10倍凝胶体积的固定液A中30 min;

在5-10倍凝胶体积的固定液B中30 min;

在50 ml的10％戊二醛中30 min。

2）倒出戊二醛溶液，加入5-10倍凝胶体积的去离子水，摇动15min。重复8次。

3）将水倒出，加入5倍凝胶体积的5 μg/ml DTT，摇动30 min。

4) 将DTI'倒掉，加入5倍凝胶体积的0.1％硝酸银，摇动30 min。

5）倒出硝酸银溶液，将凝胶用水冲洗一次（15秒），然后用几毫升碳酸盐显影液快速地冲洗2次。加入100 ml碳酸盐显影液，摇动，直至出现理想的条带。

6）加入5m1 2.3 mol/L柠檬酸，以终止染色反应。摇动10 min，换用去离子水，摇动30 min。重复操作4次。

7) 要保存凝胶，将凝胶在5-10倍凝胶体积的0.03%碳酸钠溶液中浸泡约1h，并摇动，然后置于可密封的塑料袋中，4℃保存。也可将凝胶扫描或照相。要干燥凝胶。