安装模具：

以Bio-rad公司小型垂直式电泳模具为例，参照电泳槽产品说明安装凝胶模具。

配制分离胶：

配制一定体积（5ml)、不同浓度的分离胶，可参照表13.1提供的溶液成分及详细的配制比例进行。

配制浓缩胶：

可参照溶液成分及详细的配制比例，配制5. 0ml浓缩胶。根据配制浓缩胶总体积的不同，可参照本表对各种溶液成分的体积进行必要的调整。

灌胶

分离胶在加入TEMED后，应立即混合均匀，加入到凝胶模具中，并留出浓缩胶所需空间（梳齿长约1 cm)。然后，用吸管沿玻璃板壁小心滴加一层水饱和正丁醇或双蒸水，在凝胶与覆盖液之间会看见一个明显的分界面。将凝胶垂直置于室温下，不要随意移动以免凝胶聚合后表面不平。分离胶在30min左右聚合。聚合后，原有的分界面消失，而在稍低的部位将会出现另一分界面，这就是聚合后的凝胶表面。吸出覆盖层液体，用双蒸水洗涤凝胶顶部，除去未聚合的丙烯酞胺，并用滤纸吸去残留的液体。

将配好的浓缩胶溶液快速混合后灌注在已聚合的分离胶上，并立即在浓缩胶溶液中插入干净的梳子，将凝胶垂直放置于室温下，避免移动。

浓缩胶聚合后，小心拔出梳子，用蒸馏水冲洗加样槽，除去未聚合的丙烯酰胺，将凝胶固定在电泳装置上，加入1×电泳缓冲液。

加样

应根据样品的蛋白含量确定上样量。每孔的最大上样量，以Bio -Rad的微型凝胶系统为例：

电泳：

把电泳装置放在电泳槽内，加入l×电泳缓冲液，使电泳装置底部电极丝浸于缓冲液中。将电源设定为恒流模式，电流先设置在10-20毫安／块胶，开始电泳。待蛋白样品进入分离胶后（约需15 -20min)，可将电流增至15-30毫安／块胶，并继续电泳，直至溴酚蓝到达分离胶底部后，关闭电源。从电泳装置上卸下玻璃板，取出凝胶，并最好在凝胶上标记位置。