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分子生物学检测方法主要包括核酸探针杂交技术、PCR 检测技术等。
DNA探针检测技术
DNA 探针法是将2 条碱基互补的DNA 链在适当的条件下杂交,通过检测样品与标记性DNA 探针之间形成的杂交分子来检测样品中的单增李斯特菌,测定放射性或荧光强度即可得出样品中单增李斯特菌的个数。随着探针技术的逐渐成熟,人们将多个DNA 特异性探针固定到芯片上,制成基因芯片,采用荧光标记法提高检测灵敏度。该技术可同时用于多种不同种类病原菌或毒素的检测,减少实验次数,减小工作量。
PCR 检测技术
PCR 是近年来广泛应用的分子生物学检测方法,在单增李斯特菌的检测中以其遗传物质高度保守的核酸序列(常用的靶序列包括hly、actA、prfA等)设计引物进行扩增。该方法特异性好,但灵敏度低,对样品进行前处理后再进行扩增,可以提高检出率和检测灵敏度。PCR 技术还可对单增李斯特菌进行定量检测。
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