北京普天同创生物科技有限公司
(1)斑点的原位光谱扫描
根据斑点的性质用不同光源对斑点进行原位扫描,如斑点具有颜色,选用钨灯为光源,从400~780 nm扫描;如斑点有紫外吸收,选用氘灯为光源,从200~400nm扫描,将斑点的扫描光谱图与对照品的光谱图比较其光谱图形及最大吸收波长,可作为定陛方法之一。
(2)薄层的色谱扫描
将平面色谱用薄层扫描仪在选定合适光源及固定波长下,从原点至溶剂前沿进行色谱扫描,记录在该波长下样品被分离的全部组分的峰形(q)及峰面积(A)的薄层色谱扫描图及指纹图谱分析,这对中草药及中成药成分的定性鉴别特别适用。
(3)薄层的三维光谱
将斑点的冗,值、斑点的峰面积(A)及波长(A)分别作为坐标的y、x及z轴所绘制的三维立体图,称为三维光谱图(3D—uV—TLC或3D—Vis—TLC),为薄层韵三维光谱示意图。
薄层扫描仪一般具有多波长扫描功能,图24一12是用8种波长所绘制的巴比妥盐类的三维紫外光谱一薄层色谱图。用不同颜色绘制的三维图,可直观地看到各组分在不同波长下吸收光强度及其变化情况,选择在一定波长下同时扫描测定样品中各成分的含量。自动多波长扫描可对没有完全分离的组分,通过改善光学分离度来进行定性或定量研究。
(4)薄层色谱与其他分析技术的联用
薄层色谱与其他分离分析技术联用,有利于对被分离物质进一步提供定性鉴别的特征性图谱或数据。
当样品组分复杂、被测成分含量极低时,先用薄层色谱法对粗提物进行分离纯化,定量地收集欲测组分的斑点,经洗脱、浓缩、衍生化等步骤,然后将样品溶液注入高效液相或气相色谱仪中再进行分离鉴定,可得到清晰的指纹图谱。
薄层色谱法与电化学法联用,可将样品提取液点在薄层上,经分离后,收集待测成分的斑点,用脉冲极谱法或库仑滴定。
薄层分离后的组分可用光谱法进行鉴定。薄层分离后的斑点,可直接用各种光谱法在线检测,薄层扫描法就是典型的薄层与光谱法在线联用的方法。在线检测的例子还有与红外反射法、拉曼光谱联用的报道。此外可将斑点从薄层上刮下后再与各种光谱法联用,对组分进行定性、定量研究。
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