北京普天同创生物科技有限公司
混合物在平面色谱上分离后,对得到的一个或多个需要测定的成分可以进行半定量或定量测定。所谓半定量,即可从斑点的大小和颜色的深浅与随行对照品进行比较,从而近似地估计样品中待测成分的含量;也可在测得待测物的灵敏度后,进行限量检查。定量方法则可分为间接定量(洗脱测定法)和直接定量(薄层扫描法)。
半定量
(1)目测比较法
将一系列已知浓度的对照品溶液与一定量已知浓度的样品溶液点在同一薄层或滤纸上,经展开、定位之后,将其与样品中分离得到的被测成分的斑点进行比较,即可估计出样品中该成分的含量。此法虽较粗略,但可用于不需要精确定量时,也可用于样品(特别是中草药等)中待测成分是未知的或是多种成分含量相差悬殊时,初步估计其含量高低,为定量时提供合适点样量的依据。
(2)限量检查法
用于薄层或纸色谱的限量检查有以下两种方法,这两种限量检查方法目前均被各国药典用于合成药物的纯度检查,即有关物质(中间体、副产物、异构化物及降解产物等)的检查。
①对照品法用已知对照品溶液与供试品溶液分别点样,展开、显色。直接检查供试品中所含待测成分的限度。
②自身对照法取供试品溶液稀释至一定浓度,与供试品溶液分别点样、展开、显色后,检查供试品溶液色谱中出现的被检物质斑点与供试品稀释溶液所显示的斑点进行比较。
对照品法是首选方法,适用于已有对照品,且最好纯度准确的物质;如不易得到对照品的或是未知的则可采用自身对照法,但被检物质必须与对照品斑点的颜色一致。
制定平面色谱限量检查法应进行方法学研究。如对灵敏度和检测限进行试验,要用两种以上的展开剂对供试品进行纯度检查等。
一般合成药物的纯度检查大多用薄层色谱法,纸色谱法由于展速慢、斑点不易集中,灵敏度较低,所以纯度检查时不常用。
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