1 范围

本标准规定了小鼠精原细胞或精母细胞染色体畸变试验的基本试验方法和技术要求。

本标准适用于评价受试物对小鼠生殖细胞染色体的损伤,根据具体情况选择精原细胞或精母细胞作为靶细胞。

2 术语和定义

2.1 精原细胞

雄性哺乳动物曲细精管上皮中能经过多次有丝分裂增殖并经减数分裂产生精母细胞的干细胞,为原始的雄性生殖细胞。具有体细胞相同的染色体数目。

2.2 精母细胞

精原细胞经减数分裂产生的能最终分化成成熟精子的细胞，分为初级精母细胞和次级精母细胞。次级精母细胞染色体数滅半成1n。

2.3 染色体结构畸变

在细胞有丝分裂中期,通过显微镜可以直接观察到的染色体结构变化。结构畸变可分为染色体型畸变和染色单体型畸变。

2.4 染色体型畸变

染色体结构损伤,表现为在两个染色单体的相同部位均出现断裂或断裂重接。

2.5 染色单体型畸变

染色体结构损伤,表现为染色单体断裂或断裂重接。

2.6 染色体数目畸变

染色体数目发生改变,不同于正常二倍体核型,包括整倍体和非整倍体。

3 试验目的和原理

经口给予实验动物受试样品，一定时间后处死动物。观察睾丸精原细胞或精母细胞染色体畸变情况，以评价受试样品对雄性生殖细胞的致突变性。

动物处死前,用细胞分裂中期阻断剂处理,处死后取出两侧睾丸,经低渗、固定、软化及染色后制备精原细胞或精母细胞染色体标本,在显微镜下观察中期分裂相细胞，分析精原细胞或精母细胞染色体畸变。

4 仪器和试剂

4.1 实验室常用设备

实验室常用解剖器械、电子天平、冰箱、离心机等。

4.2 试剂

4.2.1 0.1%秋水仙素

置于棕色瓶中，冰箱保存。

4.2.2 1%柠檬酸三钠

取1g柠檬酸三钠(分析纯)，加蒸馏水至100mL。

4.2.3 60%冰乙酸

取60mL冰乙酸(分析纯)，加蒸馏水至100mL。

4.2.4 固定液

甲醇：冰乙酸=3:1,现用现配。

4.2.5 磷酸盐缓冲液(PH7.4)

磷酸氢二钠溶液(1/15mol/L)：磷酸氢二钠(Na₂HPO₄，分析纯)9.47g溶于1000mL蒸馏水中。

磷酸二氢钾溶液(1/15mol/L)：磷酸二氢钾(KH₂PO₄,分析纯)9.07g溶于1000mL蒸馏水中。

取磷酸氢二钠溶液(1/15mol/L)80mL与磷酸二氢钾溶液(1/15mol/L)20mL混合,调PH至7.4。

4.2.6 GieInsa染液

称取Giemsa染液3.8g,加入375mL甲醇(分析纯)研磨,待完全溶解后再加入125mL甘油。置37℃恒温箱保温48h振摇数次。过滤两周后用。

4.2.7 Giemsa应用液

取1份Giemsa染液与9份磷酸盐缓冲液混合而成,现用现配。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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