1 范围

本标准规定了婴幼儿食品和乳品中泛酸的测定方法。

本标准适用于婴幼儿食品和乳品中泛酸的测定。

2 规范性引用文件

本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本 适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。

3 原理

利用植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum) ATCC 8014对泛酸的特异性，在含有泛酸样品中生长产生的酸度和形成的光密度来测定泛酸的含量。

4 试剂和材料

除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯试剂，水为GB/T 6682规定的二级水。

4.1 0.9%生理盐水：9.0g氯化钠溶解于1000 mL水中，分装于具塞试管中，每管10mL, 121℃灭菌15 min。每周准备一次。

4.2 泛酸钙标准品。

4.3 乙酸溶液(0.2mol/L):吸取12 mL冰乙酸用水稀释至1000 mL。

4.4 甲苯(C₇H₈)。

4.5 乙酸钠溶液(0.2mol/L):溶解16.4g无水乙酸钠于水中，稀释至1000mL。

4.6 菌株：植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum) ATCC 8014。

4.7 培养基

4.7.1 乳酸杆菌琼脂培养基：光解胨 15g,酵母浸膏5g,葡萄糖10g,番茄汁100mL,磷酸二氢钾2g,聚山梨糖单油酸酯1g,琼脂10g,加蒸镏水至1000mL,调pH至6.8±0.2(20℃～25℃)。

4.7.2 乳酸杆菌肉汤培养基：光解胨15g,酵母浸膏5g,葡萄糖10g,番茄汁100mL,磷酸二氢钾2g,聚山梨糖单油酸酯1g,加蒸镏水至1000mL,调pH至6.8±0.2(20℃～25℃)。

4.7.3 泛酸测定用培养基：葡萄糖40g,乙酸钠20g,无维生素酸水解酪蛋白10 g,磷酸氢二钾1g, 磷酸二氢钾1g，L-胱氨酸0.4g,L-色氨酸0.1g,硫酸镁0.4g,氯化钠20mg,硫酸亚铁20mg,硫酸猛20mg,硫酸腺嘌呤20mg,盐酸鸟嘌呤20mg,尿嘧啶20mg,胡萝卜素400ug,盐酸硫胺素200ug,生物素0.8 ug, p-氨基苯甲酸200 ng,烟酸lmg,盐酸吡哆醇800 ug,聚山梨糖单油酸酯0.1g,加蒸镏水至1000mL,调pH至6.7±0.1（20℃～25℃）。

4.8 Tris缓冲液：称取24.2 g Trizma Base于烧杯中，加200 mL水溶解。

4.9 盐酸（0.1mol/L）:吸取8.3mL盐酸，用水稀释至1000mL。

4.10 标准溶液

4.10.1 泛酸标准贮备液（40ug/mL）：精确称取45mg～55mg泛酸钙标准品（4.2）,溶入500mL蒸镏水中，加10mL乙酸溶液（4.3）,加100mL乙酸钠溶液（4.5）,用水稀释至泛酸钙精确浓度为43.47ug/mL（即泛酸浓度为40 ug/mL）,加0.5mL甲苯（4.4）贮于2℃～4℃冰箱中，保存期为4个月。

4.10.2 泛酸中间贮备液（1ug/mL）:取25mL标准贮备液（4.10.1）,加入蒸镏水500mL,乙酸溶液10mL（4.3），乙酸钠溶液100mL（4.5）,再用水稀释至1L。加0.5mL甲苯（4.4）贮于冰箱中 （2℃～4℃）,保存期为1个月。

4.10.3 泛酸标准工作液（10ng/mL,5ng/mL）:吸两次5.0mL中间贮备液（4.10.2）,分别用水定容至500mL和1000 mL,临用前配制。

5 仪器和设备

5.1 分光光度仪。

5.2 pH计：精度为0.01。

5.3 涡旋振荡器。

5.4 天平：感量0.1mg。

5.5 生化培养箱：36℃±0.5℃。

5.6 离心机：转速≥2000转/分钟。

相关链接：婴幼儿食品和乳品中叶酸（叶酸盐活性）的测定（四）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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