10 原理

乳与乳制品中的脂肪经皂化处理后生成游离脂肪酸，在三氟化硼催化下进行甲酯化反应，经甲酯化后的脂肪酸通过气相色谱柱分离，以氢火焰离子化检测器检测，外标法定量。

11 试剂和材料

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯或以上规格，水为GB/T6682规定的一级水。

11.1 甲醇：色谱纯。

11.2 乙醚。

11.3 石油醚：沸程30℃～60℃。

11.4 乙醇(体积分数≥95%)。

11.5 氨水(体积分数为25%)。

11.6 正己烷(C₆H₁₄):色谱纯。

11.7 高峰氏淀粉酶(Taka-Diastase):128U/mg。

11.8 三氟化硼甲醇溶液(质量分数为14%)。

11.9 饱和氯化钠溶液：溶解360g氯化钠于1.0L水中，搅拌溶解，澄清备用。

11.10 氢氧化钾甲醇溶液(0.5mol/L):称取2.8g氢氧化钾，用甲醇(11.1)溶解，并稀释定容至100mL,混匀。

11.11 焦性没食子酸甲醇溶液(10%):将1.0g焦性没食子酸溶于10mL甲醇中配制成10%焦性没食子酸甲醇溶液备用。

11.12 脂肪酸甲酯标准物质：纯度≥99%,贮存于-10℃以下的冰箱中1。

11.13 脂肪酸甲酯标准工作溶液：按试样中各脂肪酸含量及所要分析脂肪酸的种类适当配制其浓度,正己烷定容并贮存于-10℃以下的冰箱中，有效期三个月。

12 仪器和设备

12.1 天平：感量为0.1mg。

12.2 抽脂管：100mL磨口具塞试管，抽脂管干燥、恒重。

12.3 旋转蒸发仪。

12.4 离心机：转速≥5000转/分钟。

12.5 恒温水浴锅。

12.6 气相色谱仪，带FID检测器。

13 分析步骤

13.1 试样制备

预先将需冷藏的试样从冰箱中取出，放至室温。

13.1.1 液态试样

称取10g(精确到0.1mg)试样于抽脂管中，待测。

13.1.2 固态试样

13.1.2.1 含淀粉试样

称取试样1.0g(精确到0.1mg)至抽脂管中(12.2),加入0.1g高峰氏淀粉酶(11.7),加入10mL45℃～50℃的水，混合均匀后，用氮气排除瓶中空气，盖上瓶塞，置45℃±1℃烘箱内30min,取出。

13.1.2.2 不含淀粉试样

称取试样1.0g(精确到0.1mg)至抽脂管(12.2)中，加入65℃±1℃的水10mL溶解试样，振摇，使样品完全分散。

于上述试样(13.1.1和13.1.2)中加入2mL氨水(11.5),于65℃±1℃水浴锅中放置15min,取出轻摇，冷至室温。

13.1.3 无水奶油

称取试样0.2g(精确到0.1mg)于磨口烧瓶中，按13.3所述进行皂化酯化。

13.2 脂肪提取

在制备好的样品中加入10mL乙醇(11.4),混匀。加入25mL乙醚(11.2),加塞振摇1min。加入25mL石油醚(11.3)，加塞振摇1min,静置、分层，有机层转入磨口烧瓶中。再加入25mL乙醚(11.2)及25mL石油醚(11.3),加塞振摇1min,静置、分层，有机层转入磨口烧瓶中，再重复操作一次。合并抽提液于磨口烧瓶中，用旋转蒸发仪浓缩至干。

13.3 皂化酯化

在浓缩物(13.2)或无水奶油(13.1.3)中加入1.0mL焦性没食子酸甲醇溶液(11.11)。浓缩干燥之后再加入10mL氢氧化钾甲醇溶液(11.10)置于80℃±1℃水浴上回流5min～10min。再加入5mL三氟化硼甲醇溶液(11.8),继续回流15min,冷却至室温，将烧瓶中的液体移入50mL离心管中，分别用3mL饱和氯化钠溶液(11.9)清洗烧瓶三次，合并饱和氯化钠溶液于50mL离心管，加入10mL正己烷(11.6),振摇后，以5000转/分钟离心5min,取上清液作为试液，供气相色谱仪(12.6)测定。

注：三氟化硼甲醇溶液为强腐蚀性试剂，使用时应注意防护。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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