3.4 测定步骤

3.4.1 提取

称取试样100 g(精确到0.1g)于锥形瓶内，加20 mL蒸馏水和125 mL丙酮，振荡30 min。混合物经布氏漏斗抽滤；试样和残渣放回锥形瓶中，再用125 mL丙酮重复振荡15 min，再以铺有新滤纸的布氏漏斗抽滤。用50 mL丙酮洗涤锥形瓶并倒在滤渣上，抽滤，再用100 mL丙酮洗涤残渣并过滤。

3.4.2 净化

将丙酮-水提取液收集于1000 mL圆底烧瓶中，在30℃水浴上，用旋转蒸发器减压蒸发至丙酮完全除去。剩下的试样水溶液用折叠滤纸过滤，用50 mL蒸馏水洗涤烧瓶并通过同一滤器过滤，再用2×10 mL蒸馏水洗涤滤纸。将滤液转入烧杯中，滴加50％的硫酸溶液，调至pH为2.5±0.2。将样液定量转入250 mL分液漏斗中，以少量蒸馏水洗涤烧杯。然后用3×50 mL乙酸乙酯提取，收集乙酸乙酯提取液于第二个分液漏斗中。再用3×50 mL pF7的缓冲溶液提取。弃去乙酸乙酯相。收集缓冲溶液提取液于250 mL烧杯中，用50％的硫酸溶液调至pH2.5±0.2，再将溶液转入第三个250 mL分液漏斗中，用3×50 mL乙酸乙酯提取。收集乙酸乙酯相，并通过折叠滤纸滤入250 mL圆底烧瓶中，于30℃水浴中旋转蒸发至干。准确加入1.0 mL乙酸乙酯以溶解残留物。立即转入5 mL离心管，冰浴冷却5 min，以2500 r/min离心5 min。

3.4.3 薄层分离

在制备好的硅胶薄层板上，离底部2 cm的线上分别点加25 uL样液和10 uL赤霉素标准溶液(10uL/mL)。自然干燥后放入装有新配制的氯仿-乙酸乙酯-冰乙酸(10+4+1.6)展开剂的密闭槽内，让展开剂上行展开15 cm，取出。自然干燥后，用玻璃板遮住薄层展开后的样品部分，用乙醇-硫酸(9+1)溶液喷撤薄层展开后的标准样品部位，于100℃烘箱中加热10 min。冷却后，在暗室的紫外灯(发射波长365 nm)下观察，以此来对照标出样品部分相应的赤霉素组分区。将样品的赤霉素组分区域刮下，转入10 mL离心管中，加1 mL蒸馏水，混合、溶解，置冰浴中冷却5 min。同时吸取2.0 mL标准溶液(含赤霉素2 ug)到第二个试管中，冰浴冷却5 min，在每个试管中加入5 mL已冷却的85％硫酸，继续在冰浴中冷却10 min。取出试管，室温静置1h。供荧光分光光度法测定。

3.4.4 测定

3.4.4.1 荧光条件

a．激发波长：416 nm。

b．发射波长：462 nm。

3.4.4.2 荧光测定

分别将新制备的样品溶液和标准溶液装入清洁的石英池中，依次放入仪器内，测定每个溶液的荧光强度。

3.4.5 空白试验

除不加样品外，按上述测定步骤进行。

3.4.6 结果计算和表述

按下式计算：

式中：X—试样中赤霉素残留量，mg/kg ;

E—样液中赤霉素的荧光强度；

E_s—标准工作溶液中赤霉素的荧光强度；

c—标准工作溶液中赤霉素的浓度，ug/mL ;

V—样液最终定容体积；

m—最终样液中所代表的试样量，g。

注：计算结果需扣除空白值。

4 方法的测定低限、回收率

4.1 测定低限：

本方法测定低限为0.03mg/kg。

4.2 回收率

回收率的实验数据：赤霉素添加浓度在0.03～0.2mg/kg范围内，回收率为87.7％～94.3%。

相关链接：出口水果中赤霉素残留量检验方法(一）

文章来源：《食品化妆品检验卷农药残留检测方法上》

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