1范围

本标准规定了动物源性食品中阿维菌素药物残留量的酶联免疫吸附测定方法。

本标准适用于猪肉、牛肉、鸡肉、羊肉等肉制品、鱼和虾等水产品中阿维菌素残留量的筛选检测。

2 方法提要

高脂肪样品采用过柱法。其方法提要简述如下：用乙腈提取样品中阿维菌素，无水硫酸钠去除提取液中水分，离心后取乙腈相过氧化铝柱．洗脱液氮气吹干后，复溶于复溶工作液，用间接竞争性酶联免疫法进行检测。低脂肪样品采用非过柱法．除提取液不过氧化铝柱以外，其他步骤与过柱法一致。

3 试剂和材料

除另有要求外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。

3.1 甲醇。

3.2 乙腈。

3.3 正己烷。

3.4 无水硫酸钠。

3.5 碱性氧化铝柱sep-park vac 12cc(2g)或相当者。

3.6 阿维菌素酶联免疫试剂盒。

4 仪器和设备

4.1 均质器。

4.2 离心机。

4.3 旋涡混匀器。

4.4 酶标仪。

4.5 氮吹仪。

4.6 温育培养箱。

4.7 单道微量加样器：50 uL，100 uL，20 uL～200uL可调，200 uL～1000uL可调。

4.8 多通道微量加样器：50uL～250uL可调。

5 样品制备与保存

从全部原始样品取出有代表性样品约500 g，用组织捣碎机充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。将试样存放于-18℃冰箱中保存。

6 测定步骤

6.1 提取

6.1.1 高脂肪样品(如鳗鱼等)—过柱法

用均质器均质组织样本，称取3g(精确至0.1g)均质后的样品，置50 mL聚苯乙烯离心管中，加入9 mL乙腈,3 mL正己烷，涡旋混匀10 min。加入3g无水硫酸钠，涡旋混匀10 min后，15℃4000r/min离心10 min。去除上层正己烷，取下层4 mL提取液备用。取碱性氧化铝sep-park vac 12cc(2g)柱，称取3g无水硫酸钠平铺在滤板上，加入10 mL乙腈洗柱。加入4 mL下层提取液，开始收集滤液，待提取液流干后，再加入4 mL乙腈清洗柱子，合并洗液和滤液至50 mL聚苯乙烯离心管中，于50℃～60℃水浴氮气流下吹干。取1 mL稀释后复溶工作液(见6.2.1)溶解残渣，用旋涡混匀器涡旋混匀1 min，超声波溶解10 min，再涡动1 min。取出100 uL溶解后的样品液，加入100 uL稀释后复溶工作液(见6.2.1) ,涡旋混匀30 s充分混合，取20 uL用于测定。

6.1.2 低脂肪样品(如虾、肌肉等)—非过柱法

用均质器均质组织样本，称取3g(精确到0.1g)均质物至50 mL聚苯乙烯离心管中，加入9 mL乙腈、3 mL正己烷，涡旋混匀10 min。15℃ 4000r/min离心10 min。直接吸取下层液1 mL至10 mL干净的玻璃试管中，于50℃～60℃水浴氮气流下吹干。取1 mL复溶工作液溶解干燥的残留物，用旋涡混合器涡旋混匀1 min，超声波溶解10 min，再涡旋混匀 1 min。取出100 uL溶解后的样品液，加入100 uL稀释后复溶工作液(见6.2.1)，涡旋混匀30 s充分混合，取20 uL用于测定。

6.2 酶联免疫法检测

6.2.1 试剂的配制

提供的复溶工作液为2倍浓缩液。使用前用蒸馏水将复溶工作液稀释2倍使用。提供的洗涤液为20倍浓缩液。使用前用蒸馏水将浓缩洗涤液稀释20倍使用。

6.2.2 样品测定

在酶标板中分别加入20 uL不同浓度的阿维菌素标准溶液和样品待测液，在每个孔中加入80 uL的抗体工作液，轻拍混匀，用盖板膜盖板后，置温育培养箱中37℃避光孵育30 min。揭开盖板膜，弃掉酶标板孔中的液体，用洗涤液(250 uL/每孔)充分洗板4次～5次，最后一次用吸水纸拍干。加入酶标二抗100 uL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后，置温育培养箱中37℃避光孵育30 min，取出弃掉酶标板中的液体，用洗涤液(250 uL/每孔)洗板4次～5次。加入底物液A 50 uL/孔，再加入底物液B 50 uL/孔，轻轻混匀，用盖板膜盖板后，置37℃避光环境中显色15 min。每个孔加入50 uL的终止液，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450 nm处(建议用双波长450/630 nm检测，加入终止液后5 min内读完结果)，测定吸光度值(OD值)。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。