6 测定步骤

6.1 提取

6.1.1 动物肌肉、内脏

称取均匀试样2g(精确到0.01g)，置于50 mL聚丙烯离心管中，加入10 mL磷酸盐缓冲溶液(3.6)，旋涡混合2 min, 9000r/min离心5 min，提取液转移至另一50 mL聚丙烯离心管中。再加入5 mL磷酸盐缓冲溶液(3.6)，重复上述操作两次，合并提取液，混匀，待净化。

6.1.2 蛋、牛奶

称取均匀样品5g(精确到0.01g)，置于50 mL聚丙烯离心管中，加入20 mL磷酸盐缓冲溶液(3.6)，旋涡混合2 min，取10 mL样液于15 mL聚丙烯离心管中，9000r/min离心5 min，取上层液，待净化。

6.2 净化

准确移取6.1中提取液5 mL，以1滴/s速率过C₁₈固相萃取柱(3.13)，以5 mL水淋洗小柱，淋洗液完全通过小柱后，抽真空10 min以上。以5 mL甲醇(3.1)洗脱，洗脱液用15 mL聚丙烯离心管收集，45℃下氮气吹至近干，用甲醇＋0.1％甲酸水溶液(3.8)定容至1 mL,混匀。溶液经0.22um滤膜(4.12)过滤，供液相色谱-质谱/质谱测定。

6.3 测定

6.3.1 液相色谱条件

a)色谱柱：C₁₈柱．1.7 um，50 mm×2.1 mm(内径)，或相当者；

b)流动相：A: 0.1％甲酸水溶液；B：甲醇(梯度洗脱条件见表1);

表1 液相色谱的梯度洗脱条件

c)流速：0.3 mL/min;

d)柱温：40℃；

e)进样量：10 uL。

6.3.2 质谱条件

a)离子源：电喷雾离子源；

b)扫描方式：正离子扫描；

c)检测方式：多反应监测(MRM)；

6.3.3 液相色谱-质谱/质谱测定

6.3.3.1 定性测定

每种被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间，与基质标准溶液的保留时间偏差在±5％之内；且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的基质混合标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。

表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

6.3.3.2 定量测定

在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作溶液进样，以峰面积为纵坐标，基质混合工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。

6.3.4 空白试验

除不加标样外，按上述测定步骤进行。

7 结果计算与表述

按式(1)计算林可霉素、吡利霉素、克林霉素残留量，计算结果需扣除空白值。

式中：

X—试样中被测组分残留量，单位为微克每千克(ug/kg);

c—从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每升(ug/L);

V—样品溶液最终定容体积，单位为毫升(mL);

m—样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克(g)。

8 方法的测定低限与回收率

8.1 测定低限

本方法的测定低限均为0.01 mg/kg。

8.2 回收率

猪肉、鸡肉、猪肝、牛肝、鸡蛋、牛奶中林可霉素、吡利霉素、克林霉素不同添加水平的回收率数据见表3。

表3 林可霉素、吡利霉素、克林霉素不同添加水平的回收率数据

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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