北京普天同创生物科技有限公司
1 范围
本标准规定了动物源性食品中醋酸甲羟孕酮残留量的酶联免疫测定方法。
本标准适用于猪肉、牛肉、鸡肉、羊肉等肉制品及鱼和虾等水产品中醋酸甲羟孕酮残留量的筛选检测。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
GS/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3 测定方法
3.1 方法提要
用乙酸乙酯提取样品中醋酸甲羟孕酮,用间接竞争性酶联免疫法进行检测。
3.2 试剂和材料
除另有要求外,所有试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
3.2.1 甲醇。
3.2.2 乙酸乙酯。
3.2.3 正己烷。
3.2.4 无水硫酸钠:650℃灼烧4h,在干燥器内冷却至室温,贮于密封瓶中备用。
3.2.5 针筒式微孔过滤膜(0.22 um,水性)。
3.2.6 醋酸甲羟孕酮酶联免疫试剂盒。
3.2.6.196孔板(12条×8孔)包被有醋酸甲羟孕酮和载体蛋白的复合物。
3.2.6.2 抗醋酸甲羟孕酮抗体(浓缩液);4℃保存,于使用时用抗体稀释缓冲液50倍稀释,抗体稀释8h后不能继续使用。
3.2.6.3 酶标记物(浓缩液):辣根过氧化物酶和羊抗兔二抗的结合物,4℃保存,于使用时用酶标稀释缓冲液50倍稀释,酶标物稀释8h后不能继续使用。
3.2.6.4 洗涤液(浓缩液)。
3.2.6.5 底物液A。
3.2.6.6 底物液B。
3.2.6.7 10×浓缩抗体稀释缓冲液(pH 7.2):使用前用蒸馏水稀释10倍。
3.2.6.8 酶标稀释缓冲液(pH7.4)。
3.2.6.9 终止液:2 mol/L 硫酸水溶液。
3.2.6.10 乙酸甲羟孕酮系列标准液(6个倍比稀释浓度水平,外加1个空白)。
3.2.6.11 标准品贮备液:配制成1 ug/mL甲醇贮备液,4℃保存。
低温保存试剂,放置于室温不要超过4h,使用时,各溶液应达到室温。储存有效期为1年。
3.3 仪器和设备
3.3.1 均质器。
3.3.2 天平(精确到0.001g)。
3.3.3 组织粉碎机。
3.3.4 离心机。
3.3.5 旋涡混合器。
3.3.6 酶标仪。
3.3.7 氮吹仪。
3.3.8 温育培养箱(5℃~60℃)。
3.3.9 单道微量加样器:50 uL,100 uL,20 uL~200 uL可调,200 uL~1000 uL可调。
3.3.10 多通道微量加样器:50 uL~250uL可调。
3.4 制样
3.4.1 样品制备
取样品约500 g,将其切碎后,经组织粉碎机粉碎,混匀,均匀分成两份,装入洁净容器内,作为试样,密封,并标明标记。
3.4.2 样品保存
抽样后样品应立即在-18℃以下冷冻保存,0℃~5℃条件下48 h内送达实验室。在抽样和制样过程中,应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
3.4.3 样品提取
称取5g(精确到0.01g)粗粉碎样品到50 mL离心管中,加入5g无水硫酸钠,再加入20 mL乙酸乙酯,高速均质1 min~2 min,振荡5 min。室温下4 000 r/min离心10 min。取上清液4 mL于40℃氮气吹干。
3.4.4 样品净化
用1.5 mL 80%的甲醇/水溶解残渣。加入1 mL正己烷,振荡1 min脱脂,离心2 min,吸去正己烷,重复此步两次。在40℃氮气吹干。用2 mL 5%的甲醇/抗体稀释缓冲液溶解残渣,将此溶液羟微孔过滤膜(0.22 um,水性)过滤,进行测定。
文章来源:《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》
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