3.5 酶联免疫测定

3.5.1 测定步骤

己烯雌酚试剂盒中所有试剂的温度均应回升至室温(20℃～25℃)后方可使用。测定中吸取不同的试剂和样品溶液时应更换吸头。

将测定需用的微孔条插入框架(标准液和样液、空白分别作平行试验测定)，记录标准液和样液的位置。分别吸取20 uL己烯雌酚标准溶液、样品溶液至各自的微孔，再加入50 uL已稀释的己烯雌酚抗体至每个微孔，持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀后，然后用封口膜密封孔条以防溶液挥发。于2℃～8℃避光孵育至少20 h。微孔板恢复至室温，倒掉微孔中的液体，用洗涤缓冲液洗板操作3次。加入50 uL已稀释的己烯雌酚酶标记物，充分混匀，室温孵育1h。倒掉微孔中的液体，洗板操作3次。加入50 uL酶基质和50 uL发色剂至各微孔中，充分混匀，20℃～25℃暗处避光孵育30 min。加入100 uL反应终止液至每个微孔中，充分混匀，在30 min内测量并记录每个微孔溶液450 nm波长的吸光度值。

3.5.2 空白试验

除不称取试样外，均按上述步骤进行。

3.6 结果计算

按式(1)计算百分比吸光度值：

式中：

B_{样品/标准}—标准品或样品的平均吸光度值，％；

B_空白—空白孔的平均吸光度值；

B₀—零标准的平均吸光度值。

以百分比吸光度值为纵坐标，以己烯雌酚标准溶液的浓度(ng/mL)的对数为横坐标，绘制出校正曲线。每次试验均应重新绘制校正曲线、从标准曲线上得到试样中相应的己烯雌酚浓度后，结果按式(2)进行计算：

式中：

X—样品中己烯雌酚的残留量，单位为微克每千克(ug/kg)；

c—从标准曲线上得到的样品中己烯雌酚浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

V—样品溶液的最终定容体积，单位为毫升(mL)；

m—样品溶液所代表的最终试样质量，单位为克(g)。

也可以用各种酶标仪的数据处理软件进行计算，所得结果表示至一位小数。

4 检测限

本方法的检出限为0.5 ug/kg。

5 确证试验

如被测样品中己烯雌酚残留量的值大于限量要求时，应用其他方法进行确证。

相关链接：肉及肉制品中己烯雌酚残留量检测方法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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