3.4 测定步骤

3.4.1 样液制备

称取4g试样(精确至0.1g)，置于洁净50 mL具塞离心瓶中。加入10 mL无水乙醚，振荡10 min后，3500r/min离心5 min。用尖嘴吸管吸弃水层，分离乙醚提取液于另一洁净50 mL具塞的离心瓶中。再加入10 mL无水乙醚，按上述步骤重复提取一次。合并两次乙醚提取液，于(40±1)℃水浴蒸干。测试前准确加入1 mL溶液B(3.2.7)以溶解残渣，制成样液。

3.4.2 标准曲线的绘制

取18只试管并编号，按下述操作过程制备。

1号、2号作为测量非特异结合(NSB)用双管。分别依次加入250uL溶液A(3.2.6)、100uL uL ¹²⁵ I-E₃(3.2.10)，充分混匀。

3号、4号作为测量特异结合(B₀)用双管。分别依次加入50uL溶液A(3.2.6)、100uL ¹²⁵ I-E₃ (3.2.10)、200 uL E₃-Ab(3.2.9)，充分混匀。

5～18号为标准管(B)，分别加入50 uL不同浓度雌三醇标准工作液(3.2.14)(均做双试验)，每管再依次加入100uL ¹²⁵I-E₃、 200uL、E₃-Ab，充分混匀。

以上各管混匀后，于(37±1)℃水浴中放置1h，最后加入500 uL免疫分离剂(3.2.11)，室温放置15 min, 3500r/min离心15 min，吸弃上清液，上机测定沉淀物的放射性计数。

按式(1)计算B/B₀值：

式中：B/B₀—结合率，％；

B₀—特异结合双管(即3号、4号管)计数均值；

B—标准工作液各浓度双管计数均值；

NSB—非特异结合双管(即1号、2号管)计数均值。

求出标准管B/B₀(％)值后，以此为纵坐标，各标准工作液浓度为横坐标，在半对数坐标纸上绘制标准曲线。

3.4.3 样液测定

取两支试管，分别加入50uL样液、100uL ¹²⁵ I-E₃和200 uLE₃-Ab，按3.4.2操作步骤测定，求出B/B₀值，然后从标准曲线中查出样液中雌三醇的浓度。

3.4.4 空白试验

使用经活性炭脱激素的肉样，按上述测定步骤进行操作。

3.5 结果计算和表述

按式(2)计算试样中雌三醇残留含量：

式中：X—试样中雌三醇残留含量，ug/kg；

c—从标准曲线上查得样液中雌三醇浓度，ng/mL；

V—样液最终定容体积，mL；

m—所称试样量，g。

注：计算结果应扣除空白值。

4 测定低限、回收率

4.1 测定低限

本方法的测定低限为5 ug/kg。

4.2 回收率

牛肉中雌三醇添加浓度及其回收率实验数据：

在5ug/kg时．回收率为84.8％;

在10ug/kg时，回收率为88.5％；

在20ug/kg时，回收率为95.9％。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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