1 范围

本标准规定了出口肉及肉制品中雌三醇残留量检验的抽样、制样和放射免疫测定方法。

本标准适用于出口冻牛肉中雌三醇残留量的检验。

2 抽样和制样

2.1 检验批

以不超过2500件为一检验批。

同一检验批内的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。

2.2 抽样数量

2.3 抽样方法

按2.2规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。从每件中至少取一袋作为原始样品。如每件中无小包装或有小包装，但每袋小包装重量超过2 kg者，则可用灭菌刀具在抽出的包件中每件割取不少于100 g，混合后置于清洁容器内，作为混合原始样品。混合原始样的总重量不少于2 kg。加封后，标明标记，及时送交实验室。

2.4 试样制备

从混合原始样品中取出部分代表性样品，将可食部分放入绞碎机中绞碎，充分混匀，用四分法缩分出不少于500 g，均分两份，装入洁净容器内作为试样，加封并标明标记。

2.5 试样保存

将试样于-18℃以下冷冻保存。

注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

3 测定方法

3.1 方法提要

用无水乙醚提取试样中残留的雌三醇，提取液经蒸干，残渣用缓冲液溶解并定容后与雌三醇抗体及碘标记的雌三醇抗原反应，经保温后，加免疫分离剂并离心，吸弃上清液，残渣用γ-放射免疫计数仪进行计数测定，标准曲线法定量。

3.2 试剂和材料

除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。

3.2.1 无水乙醚。

3.2.2 无水乙醇。

3.2.3 二甲基亚砜。

3.2.4 活性炭(60 um)。

3.2.5 磷酸盐缓冲液：pH7.4。取81 mL 0.02 mol/L磷酸氢二钠溶液与19 mL 0.02 mol/L磷酸二氢钠溶液混合。

3.2.6 溶液A：含有2‰牛血清蛋白(BSA)和1‰叠氮钠的磷酸盐缓冲液。

3.2.7 溶液B：含有2％二甲基亚砜(DMF)的溶液A。

3.2.8 雌三醇标准品：纯度≥99％，美国SIGMA公司提供(或相当者)。

3.2.9 雌三醇抗体(E3-Ab):4℃保存，北京北方免疫试剂研究所提供(或相当者)。

3.2.10 雌三醇碘标记物(125I-E3):4℃保存(有效期内使用)，北京北方免疫试剂研究所提供(或相当者)。

3.2.11 分离剂：北京北方免疫试剂研究所提供(或相当者)。

3.2.12 雌三醇标准储备液：称取4 mg雌三醇标准品(精确至0.1mg)，用无水乙醇溶解并定容至100mL～15℃保存(可保存半年)。

3.2.13 雌三醇标准中间液：取雌三醇标准储备液1 mL、于 100 mL容量瓶中，吹干后，用溶液A(3.2.6)定容，其浓度为400ng/mL, 4℃保存(新鲜配制)。

3.2.14 雌三醇标准工作液：取适当雌三醇标准中间液，用溶液A(3.2.6)稀释成浓度为0,5,10,25,50,100,200 ng/mL标准工作液(当日新配)，用以制备标准曲线。

3.3 仪器和设备

3.3.1 γ-放射免疫计数仪。

3.3.2 均质器：不低于15000r/min。

3.3.3 离心机：不低于4000r/min。

3.3.4 电热恒温水浴锅：0～60℃。

3.3.5 微量移液管：50～500uL。

3.3.6 涡流混均器。

3.3.7 具塞离心瓶：50 mL。

3.3.8 刻度移液管：0.5～20 mL。

相关链接：出口肉及肉制品中雌二醇残留量检验方法（二）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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